تقييم النشاط المعدل للمناعة لمحفز ثنائي الخصوصية للخلايا التائية مشفر فيروسياً

ابدأ ببير بئر اختبار يحتوي على خلايا ورمية معدلة وراثياً تعبر عن مستضد مستهدف، وبئر تحكم يحتوي على خلايا ورمية تفتقر إلى هذا المستضد.

استخدم محفز خلايا T ثنائي الخصوصية (BTE) مشفر بواسطة جين ناقل فيروسي، يحتوي على موقعي ارتباط، أحدهما للمستضد المستهدف والآخر لمستقبل خاص بخلايا T.

أضف BTE والخلايا التائية T cells إلى الآبار ثم قم بالتحضين.

في العينة المختبرة، يعمل BTE على الربط التشابكي بين الخلية الورمية والخلية التائية، مما يحفز الخلية التائية على إطلاق الحبيبات الحالة للخلايا.

يؤدي هذا إلى تحلل الخلية الورمية، مما يتسبب في إطلاق إنزيم داخل خلوي.

في عينة التحكم، يرتبط BTE بالخلية التائية فقط، مما يتجنب تحلل الخلية الورمية.

قم بإجراء عملية الطرد المركزي وجمع السائل الطافي.

أضف الركيزة ثم قم بالتحضين.

يقوم الإنزيم بتحفيز تحويل مادة الركيزة إلى منتج ذي لون أحمر.

أضف محلول الإيقاف وقم بقياس كثافة اللون.

تؤكد الكثافة الأعلى في العينة المختبرة النشاط المناعي المعدل الخاص بالهدف لـ BTE.

لبدء تقييم السمية الخلوية بوساطة الخلايا والمحفزة بواسطة BTE عن طريق تحلل LDH، قم أولاً بعزل منتجات الجينات المنقولة المفرزة والتي تعبر عنها الخلايا المستهدفة المصابة بالفيروس، وقم بعزل الخلايا المناعية المؤثرة كما هو موضح في المخطوطة. ثم ازرع الخلايا المستهدفة في طبق 96 بئراً بقاع على شكل حرف U وأضف العينات كما هو