موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:37 دقيقة • September 30th, 2026
ابدأ باستخدام طافي مزرعة خلايا ثديية يحتوي على فيروس التهاب الكبد C.
قم بتخفيف المعلق الفيروسي تسلسلياً في وسط النمو.
قم بتلقيح كل تخفيف على طبقة أحادية من خلايا الورم الكبدي ثم حضنها.
يدخل الفيروس إلى الخلايا، ويحرر جينومه، ويعبر عن البروتينات الفيروسية، بما في ذلك بروتين التضاعف غير البنيوي.
ينتج عن ذلك جسيمات فيروسية جديدة تتبرعم وتصيب الخلايا المجاورة، مما يؤدي إلى تكوين بؤر من الخلايا المصابة.
بعد الحضن، قم بإزالة الوسط وإضافة المادة المثبتة. يتم الحضن في درجة حرارة باردة لتثبيت الخلايا ونفاذية الغشاء.
اغسل الخلايا وأضف محلولاً مانعاً (blocking buffer) لمنع الارتباط غير النوعي للأجسام المضادة.
أضف الأجسام المضادة الأولية التي ترتبط ببروتين التضاعف غير البنيوي.
اغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
بعد ذلك، يتم إدخال أجسام مضادة ثانوية مقترنة بفلوروفور ترتبط بالأجسام المضادة الأولية.
اغسل مجدداً لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة. أضف صبغة مرتبطة بالـ DNA لتلوين النوى.
قم بالتصوير باستخدام مجهر فلوري وتقدير كمية البؤر الفلورية لتحديد تركيز الفيروس في السائل الطافي.
قم بنثر خلايا Huh-7.5.1 الساذجة بكثافة تقريبية تبلغ 3 × 10³ خلية لكل بئر باستخدام طبق ذي 96 بئراً. في اليوم التالي، قم بإجراء تخفيفات تسلسلية بمقدار عشرة أضعاف للمادة الطافية لزراعة خالية من الخلايا تم جمعها من خلايا تم نقل
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية