تصوير الكبح النسخي في الخلايا المصابة بالفيروسات

ابدأ باستخدام شرائح غطاء تحمل خلايا ثديية عولجت مسبقاً بنظير اليوريدين، بحيث تكون إحدى المجموعتين مصابة بالفيروس والمجموعة الأخرى غير مصابة.

في الخلايا المصابة بالفيروسات، ترتبط البروتينات الفيروسية بجهاز النسخ في الخلية المضيفة وتثبط إنتاج الحمض النووي الريبي (RNA) للمضيف، بينما يظل تخليق الحمض النووي الريبي (RNA) مستمراً دون انقطاع في الخلايا غير المصابة.

اغسل باستخدام محلول منظم. أضف البارافورمالديهيد لتثبيت الخلايا، ثم اغسلها. أضف مادة منظفة لنفاذ الأغشية الخلوية، ثم اغسلها.

انقل شرائح التغطية إلى غرفة رطبة.

أضف محلول صبغ النقرة الذي يحتوي على أزيد فلوري، وعامل حفاز، وعامل مختزل، ثم قم بالتحضين في الظلام.

يعمل العامل المختزل على تنشيط المحفز، مما يتيح للأزيد الفلوري الارتباط بالـ RNA الناشئ المسمى باليوريدين.

اشطف شرائح التغطية في المحلول المنظم، واغمسها في الماء، ثم أزل الرطوبة الزائدة.

باستخدام وسط تثبيت مانع للتلاشي، قم بتثبيت شرائح التغطية على شريحة زجاجية واتركها لتجف في الهواء.

تحت مجهر فلوري مقلوب، تشير كثافة الإشارة المنخفضة في الخلايا المصابة مقارنة بالخلايا غير المصابة إلى تثبيط عملية النسخ الناجم عن الفيروس.

ضع أغطية شرائح دائرية بقطر 12 millimeter في كل بئر من أطباق زراعة الأنسجة ذات الـ 12 بئراً. بعد ذلك، ازرع خلايا 293 في 1 milliliter من وسط DMEM الكامل. حضن الخلايا في حاض