إنتاج الجسيمات الفيروسية القهقرية لنقل الجينات

ابدأ بمزرعة من الخلايا الظهارية الكلوية البشرية النامية في وسط غني بالمغذيات.

استبدل الوسط بوسط منخفض المصل لتقليل تداخل المصل وتحسين كفاءة عفن الخلايا (transfection).

أضف خليط التعداء (transfection mixture) إلى الخلايا قطرة تلو الأخرى.

يحتوي الخليط على بنية DNA لفيروس قهقري تحمل الجين المستهدف، وبلازميد تغليف يوفر البروتينات الفيروسية الأساسية، وبولي إيثيلين إيمين، الذي يشكل معقدات مع DNA البلازميد لتسهيل عملية عفن الخلية (transfection).

يتم تحضين الخلايا للسماح بامتصاص معقد الـ DNA.

استبدل الوسط لإزالة بقايا كواشف عفن التحول.

داخل الخلية، يدخل الحمض النووي البلازميدي (plasmid DNA) إلى النواة، حيث يوجه عملية إنتاج البروتينات الفيروسية والحمض النووي الريبوزي الفيروسي (viral RNA) الذي يحمل الجين المستهدف.

تتجمع هذه المكونات وتتبرعم في الوسط على شكل جزيئات فيروسية قهقرية مؤتلفة.

قم بجمع الوسط الذي يحتوي على الفيروس وتخزينه لفترة وجيزة في درجة حرارة منخفضة للحفاظ على استقرار الفيروس.

قم بإجراء الطرد المركزي لترسيب الحطام الخلوي.

قم بتقسيم السائل الطافي الفيروسي إلى حصص (Aliquot)، ثم قم بتجميده سريعاً في النيتروجين السائل، واحفظه في درجة حرارة منخفضة لاستخدامه في تجارب نقل الجينات لاحقاً.

في طبق بتري بقطر 16 سنتيمتراً، يتم استزراع معلق خلوي أحادي من خلايا Bosc23 في 18 ملليلتر من وسط DMEM المكمل ب