اختبار معايرة اللويحات لقياس كمية الفيروس المخلوي الجدري المعدي

قم بإجراء تخفيفات متسلسلة لمعلق فيروس المزامنة التنفسي (RSV).

قم بتلقيح كل تخفيف في آبار منفصلة من طبق متعدد الآبار مستزرع بخلايا ثديية حساسة لـ RSV.

يتم التحضين للسماح للفيروس بالارتباط بمستقبلات سطح الخلية، وتحفيز اندماج الغشاء، وإطلاق جينومه في السيتوبلازم.

بعد ذلك، يتم وضع وسط تغطية شبه صلب لتقييد انتشار الفيروس، ثم التحضين.

تعبر الخلايا المصابة عن بروتين الاندماج الفيروسي الذي يتوسط الاندماج من خلية إلى أخرى، مما يؤدي إلى تكوين هياكل متعددة النوى تسمى المدمج الخلوي (syncytia).

ومع تقدم عملية التضاعف الفيروسي، تتحلل هذه المدمجات (syncytia) وتُشكل مناطق شفافة تُعرف بالبقع (plaques).

رجّ الطبق برفق لإزالة الطبقة العلوية، ثم اشطف الخلايا للتخلص من الحطام.

قم بتطبيق صبغة لتلوين الخلايا الحية، مع ترك اللويحات غير مصبوغة.

قم بإزالة الصبغة، وطهر الطبق باستخدام المبيض، ثم اشطفه بالماء.

اترك الطبق ليجف في الهواء.

اختر الآبار التي تحتوي على لويحات واضحة وقم بعدها لتحديد العيار الفيروسي.

لإجراء مقايسة معايرة اللويحات، قم أولاً بتحضير وسط أساسي أدنى بتركيز 2X عن طريق تخفيف وسط MEM التجاري بتركيز 10X بالماء المعقم وإضافة L-glutamine، و1,000 وحدة لكل ملليلتر من penicillin، ومليغرام واحد لكل ملليلتر من streptomycin. رجّ التخفيف بقوة واحفظه في درجة حرارة 4 °C، ثم أضف 900 µL من وسط MEM الخالي من FCS إلى س