توليد خلايا جذعية جنينية للفئران مصابة بالفيروس البطيء

ابدأ باستخدام فيروسات لينتيفيروسية تحمل جيناً لمقاومة المضادات الحيوية.

قم بإجراء الطرد المركزي لفصل الحطام. اجمع الطافي الذي يحتوي على الفيروسات ومرره عبر غشاء خالٍ من المواد الخافضة للتوتر السطحي.

يسمح ذلك بمرور الفيروسات البطيئة مع الاحتفاظ بالملوثات.

استخدم جهاز الطرد المركزي الفائق لتركيز الفيروسات. ثم تخلص من الطافي وأضف المحلول المنظم لإعادة تعليق الفيروسات.

ثم انقل المعلق إلى أنبوب جهاز طرد مركزي دقيق وقم برجّه باستخدام جهاز الـ vortex.

قم بالطرد المركزي لإزالة الفقاعات. بعد ذلك، أضف الفيروسات إلى وسط عدوى يحتوي على خلايا جذعية جنينية فأرية وامزجها.

يتم إجراء الطرد المركزي لتعزيز التلامس بين الفيروس والخلايا، ثم يتم التحضين.

تقوم الفيروسات بإيصال جينوماتها إلى داخل الخلايا.

أزل الوسط، وأضف وسطاً طازجاً ثم حضن الخلايا.

يتحول الجينوم الفيروسي إلى DNA ويندمج في جينوم المضيف، مما يتيح إنتاج mRNA الذي يوجه تخليق بروتين المقاومة للمضاد الحيوي.

استبدل الوسط بوسط طازج مضاف إليه المضاد الحيوي الانتخابي ثم قم بالتحضين.

تنجو الخلايا التي تعبر عن بروتين مقاومة المضاد الحيوي، مما يؤدي إلى الحصول على خلايا مستقرة مصابة بالفيروس.

قم بعد الخلايا باستخدام مقياس كرات الدم (hemocytometer).

قم بنقل خلايا mESCs المُحضرة مسبقاً إلى طبق بـ 12 بئراً بمعدل 100,000 خلية لكل بئر قبل يوم واحد من العدوى. بالنسبة لل