وسم بقايا السيستين المتاحة على السطح في الجسيمات الشبيهة بالفيروسات المهندسة

ابدأ باستخدام معلقات من الجسيمات الشبيهة بالفيروسات (VLPs) الطافرة والمنقاة من أوراق التبغ المصابة.

تحتوي جزيئات VLPs الطافرة على بقايا سيستئين مدرجة جينياً في مواقع محددة في بروتين الغلاف الفيروسي.

أضف صبغة فلورية مقترنة بالماليميد، ثم حضّن المزيج في الظلام.

يرتبط المالييميد فقط ببقايا السيستين المكشوفة على سطح الجسيمات الشبيهة بالفيروس (VLP)، بينما تظل بقايا السيستين المدفونة داخل بنية البروتين غير قابلة للوصول وتبقى غير مُوسومة.

أضف عاملاً مختزلاً لحجب أي صبغة غير متفاعلة ومنع الوسم غير النوعي.

قم بتحميل العينات في أعمدة إزالة الأملاح المحشوة براتنج مسامي، ثم قم بالطرد المركزي لتنقية الجزيئات الشبيهة بالفيروسات (VLPs) الموّسمة.

تنتشر الأصباغ والعوامل المختزلة غير المتفاعلة داخل حبيبات الراتنج المسامية ويتم الاحتفاظ بها، بينما تُستبعد الـ VLPs الأكبر حجماً من المسام وتخرج أولاً.

يمكن الآن تحليل الجسيمات الشبيهة بالفيروسات (VLPs) الموسومة فلورياً باستخدام الرحلان الكهربائي للهلام.

تظهر النطاقات الفلورية على الجل الطفرات الموسومة التي تحتوي على بقايا سيستئين معرضة على السطح.

بعد إنتاج نسخ T7-RNA ذات القبعات من بلازميدات ناقلة تعتمد على فيروس البطاطس X وتحمل جينات البروتين الغلافي للنوع البري من MRFV وجينات البروتين الغلافي المتحورة في السيستين، استخدم حصتين بحجم 10 µL لكل منهما لتلقيح ورقتي