موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:41 دقيقة • September 30th, 2026
خذ أنبوباً يحتوي على مزرعة بادئة من خلايا E. coli المهندسة، والتي تحمل جين T7 polymerase المنظم بواسطة مشغل lac بالإضافة إلى بلازميد تعبير.
يحمل البلازميد جيناً يشفر بروتين غلاف مشتقاً من العاثية Qβ.
يتم تنظيم هذا الجين بواسطة محفز T7 ومشغل lac.
انقل المزرعة إلى دورق يحتوي على وسط غذائي.
حضّن مع الرج لتعزيز النمو البكتيري.
أضف نظيراً اصطناعياً لـ allolactose يقوم بتعطيل كابت الـ lac، مما يحفز تعبير T7 polymerase.
يرتبط إنزيم T7 polymerase بعد ذلك بمحفز T7 الموجود على البلازميد ويقوم بنسخ جين بروتين الغلاف، والذي يتم ترجمته لإنتاج بروتين الغلاف.
تتجمع بروتينات الغلاف هذه ذاتياً لتكوين جسيمات شبيهة بالفيروسات (VLPs) تشكل سقالات غير معدية.
انقل المزرعة إلى زجاجات الطرد المركزي.
قم بإجراء الطرد المركزي لترسيب الخلايا.
تخلص من الطافي وانقل الراسب إلى أنبوب.
أصبح راسب الخلايا، الذي يحتوي على الجسيمات الشبيهة بالفيروسات (VLPs) داخل الخلوية، جاهزاً للتنقية.
قبل البدء في إجراء التعبير عن العاثية Q-Beta، امسح منطقة العمل بمحلول مكون من المبيّض والإيثانول بنسبة 1:1. وفي بيئة معقمة، قم بتحضير مزرعتين بادئتين بحجم ثلاثة ملليمترات لكل منهما عن طريق إضافة مستعمرات مفردة من بكتيريا E.كولاي (coli) أضف سلالة BL21 إلى وسط SOB. قم بتنمية المزارع في غرفة درجة حرارتها 37 درجة مئوية ورطوبتها النسبية 0% مع الرج بسرعة
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية