الوظائف الفلورية للجزيئات الشبيهة بالفيروسات عبر إعادة جسر ثنائي الكبريتيد

ابدأ باستخدام جسيمات شبيهة بالفيروسات (VLPs)، التي تحتوي على روابط ثنائي كبريتيد مكشوفة على سطح القفيصة.

أضف عاملاً مختزلاً لكسر روابط ثنائي الكبريتيد، مما يؤدي إلى تكوين مجموعات ثيول حرة مع الحفاظ على بنية القفيصة.

اجمع الجسيمات الشبيهة بالفيروسات (VLPs) المختزلة مع بولي إيثيلين جليكول متفاعل مع الثيول، أو رابط PEG، لمنع إعادة أكسدة الثيول.

يقوم الرابط PEG بإعادة جسر كل زوج من الثيول عن طريق تكوين رابطتين تساهميتين.

يؤدي هذا الاقتران التساهمي أيضاً إلى تكوين بنية فلورية تظهر باللون الأصفر الساطع تحت الإضاءة بالأشعة فوق البنفسجية UV.

قم بتدوير الخليط لفترة طويلة للسماح بإتمام عملية الاقتران بالكامل.

باستخدام الترشيح المركزي، قم بتنقية الجسيمات الشبيهة بالفيروسات (VLPs) المرتبطة بالبولي إيثيلين جليكول (PEGylated) عن طريق إزالة الجزيئات الصغيرة غير المتفاعلة مع الاحتفاظ بالمركبات المقترنة السليمة.

قم بإجراء تحليل SDS-PAGE غير مختزل للكشف عن ارتباط PEG، والذي يُستدل عليه من خلال ظهور حزمة فلورية لبروتين الغلاف.

قيم السلامة الهيكلية باستخدام الرحلان الكهربائي لهلام الأجاروز الأصلي، حيث تؤكد النطاقات المتماثلة لـ VLPs المُرتبطة بـ PEG وتلك غير المُرتبطة بـ PEG وجود VLPs سليمة.

ينتج هذا البروتوكول جسيمات شبيهة بالفيروسات (VLPs) فلورية وموظيفية بـ PEG، وهي مناسبة لتطبيقات التصوير أو التوصيل المسته