موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:06 دقيقة • September 30th, 2026
ابدأ بطبقة أحادية من الخلايا الملتصقة والقابلة للإصابة بالفيروس.
اغسل الخلايا، ثم أضف عامل تفكيك لفصلها.
قم بإجراء الطرد المركزي وتخلص من السائل الطافي. اغسل الخلايا لإزالة الوسط المتبقي.
أعد تعليق الخلايا في محلول ملحي منظم، ثم انقل الخلايا إلى كوفت.
أدخل RNA منسوخًا من استنساخ cDNA كامل الطول لفيروس التهاب الدماغ الياباني (JEV) محمول على كروموسوم اصطناعي بكتيري.
تطبيق نبضات كهربائية لنفاذ غشاء الخلية بشكل مؤقت، مما يسمح بدخول RNA.
اترك الخلايا لتتعافى، ثم انقلها إلى وسط زراعي.
يُحاكي الـ RNA المُدخل الـ RNA الفيروسي الأصلي لإنتاج فيريونات جديدة.
قم بتخفيف الخلايا تسلسلياً وزرعها على طبقات أحادية من الخلايا الطازجة.
قم بالتحضين للسماح للجسيمات الفيروسية بإصابة الخلايا المجاورة.
التغطية بأوساط الآغاروز والتحضين. يشكل الوسط طبقة شبه صلبة، مما يحد من انتشار الفيروس إلى الخلايا المجاورة.
تتحلل الخلايا المصابة وتُشكل لويحات منفصلة، مما يؤكد النجاح في استعادة فيروس JEV المعدي.
ابدأ باستخدام خلايا BHK-21 التي تم إنماؤها لمدة 24 ساعة في أطباق قطرها 150 مليمتر بكثافة 3 ملايين خلية لكل طبق. اشطف الطبقة أحادية الخلايا باستخدام المحلول A البارد، ثم افصلها عن طريق المعالجة بالتربسين. اجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي عند 270 g لمدة دقيقتين.
ثم أعد تعليق الخلايا في 50 milliliters من المحلول A البارد وقم بط
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية