التحضير الآمن لعينات الفيروسات للمجهر الإلكتروني النافذ

داخل كابينة الاحتواء البيولوجي، اسحب معلقاً فيروسياً شديد العدوى إلى كبسولة تحتوي على شبكات TEM.

يتم التحضين في وضع أفقي للمساعدة في التصاق الفيروسات بشكل متساوٍ عبر الشبكة.

قم بإزالة المعلق الذي يحتوي على الفيروسات غير المرتبطة، ثم أضف مادة مثبتة لربط البروتينات تشابكياً، مما يحافظ على بنية الفيروس ويقلل من القدرة العدوائية.

بعد الحضانة، يتم الغسل لإزالة المثبت المتبقي.

أضف صبغة سلبية كثيفة الإلكترونات، والتي ترتبط بالشبكات المحيطة بالفيروس وتعزز التباين أثناء التصوير.

أخرج الماصة وقم بتجفيف الشبكات لإزالة الصبغة الزائدة.

ضع الكبسولة في أنبوب طرد مركزي يحتوي على ورق ترشيح مشبع برابع أكسيد الأوزميوم، ثم أغلق الأنبوب بإحكام واتركه للحضانة من أجل التثبيت بالبخار.

يعمل رباعي أكسيد الأوزميوم على تثبيت بنية الغشاء الدهني، وتحسين تباين التصوير، وتعطيل الفيروس تماماً، مما يسمح بنقله بأمان خارج منطقة الاحتواء البيولوجي.

داخل مرفق TEM، اشطف الشبكات، واتركها تجف في الهواء، ثم خزنها من أجل التصوير.

تضمن هذه الطريقة تعاملاً أكثر أماناً مع العينات الفيروسية وتسهل عملية تحضير العينات.

في البداية، قم بتثبيت الكبسولة في الماصة. اسحب 40 µL من معلق الفيروس داخل الكبسولة. ضع الماصة على جانبها، مع توجيه الشبكات أفقياً لمدة 10 دقائق. بعد ذلك، ارفع الماصة وفرغ محلول الفيروس في حاوية النفايات. اسحب 40 µL من مثبت ا