إعادة التشكيل والتنقية المختبرية للجسيمات الشبيهة بالقفيصة النووية الفيروسية

ابدأ بمعقد بروتين نووي-بروتين فسفوري خالٍ من RNA ومُعبّر عنه بالتأشيب ويكون خاصاً بفيروس معين.

قم بتحضين المعقد مع قليلات النوكليوتيد من الحمض النووي الريبي (RNA) الخاصة بالفيروس لبدء تجميع جسيمات شبيهة بالنواة البروتينية.

أثناء عملية التجميع، يزيح الـ RNA الفيروسي قطعة البروتين الفسفوري، مما يسمح للبروتين النووي بتغليف الـ RNA، مكوناً جسيمات شبيهة بالقفيصة النووية.

قم بطرد العينة مركزياً لإزالة أي راسب.

استخدم عمود كروماتوغرافيا استبعاد الحجم موازن مسبقًا ومعبأ براتنج مسامي، ثم قم بتحميل السائل الطافي عليه.

بينما يتدفق العينة عبر العمود، يتم استبعاد معقدات القفيصة النووية الكبيرة من المسام وتخرج أولاً.

تدخل المعقدات البروتينية متوسطة الحجم وجزيئات RNA الصغيرة عبر المسام وتخرج في وقت لاحق.

راقب امتصاصية السائل المستخلص لإنشاء ملف شطف يحتوي على قمم متميزة.

تظهر القمة الأولى القفيصات النووية المُجمعة، تليها مجمعات بروتينية أصغر وحمض RNA حر.

اجمع الجزء الذي يتوافق مع ذروة القفيصة النووية من أجل التحقق والتحليل الإضافي.

لتجميع القفيصات النووية الخاصة بالفيروس، اخلط معقد N0P المنقى مع RNA oligo بنسبة مولية 1:1.5 واتركهما في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. قم بموازنة عمود ترشيح هلامي للتنقية صغير الحجم مسبقاً باستخدام المنظم E، ثم تخلص من أي رواسب عن طريق الطرد المركزي.

قم بتحميل المادة الطافية