موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:37 دقيقة • September 30th, 2026
ابدأ باستخدام طبق متعدد الآبار يحتوي على خلايا طلائية مصابة بفيروس زيكا، وهو فيروس حمض نووي ريبوزي (RNA) أحادي السلسلة.
أثناء العدوى، يطلق الفيروس الـ RNA الذي يشكل وسيطاً من الـ RNA مزدوج السلسلة أو dsRNA.
وللكشف عن هذه الوسائط من dsRNA، استبدل الوسط بميثانول لنفاذ الخلايا والحفاظ على سلامتها الخلوية.
أزل الميثانول واغسل باستخدام محلول منظم.
أضف محلول الحجب لمنع الارتباط غير النوعي للأجسام المضادة.
أضف جسماً مضاداً أولياً متخصصاً بـ dsRNA الفيروسي.
يُحضن المزيج مع هزّ خفيف في درجة حرارة منخفضة للسماح للأجسام المضادة الأولية بالارتباط بـ dsRNA الفيروسي.
اشطف باستخدام محلول منظم، ثم أضف جسماً مضاداً ثانوياً مقترناً بفلوروفور أحمر واحضنه.
ترتبط الأجسام المضادة الثانوية بالأجسام المضادة الأولية.
اغسل بمحلول منظم، ثم أضف صبغة فلورية مرتبطة بـ DNA لصبغ النواة.
افحص العينة تحت مجهر فلوري لتصور وسيط dsRNA الفيروسي المسمى داخل الخلية المصابة.
لإجراء الكيمياء النسيجية المناعية، يتم إزالة الوسط من آبار صفيحة الـ 12 بئراً، وإضافة 1 ml من الميثانول إلى كل بئر. تُترك الخلايا للتثبيت عند 4 °C لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك، تُغسل الخلايا المثبتة ثلاث مرات باستخدام 1x PBS. ثم يُضاف محلول الحجب ويُحضن لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. يتم تخفيف الجسم المضاد أحادي النسيلة للفأر المضاد لـ RNA مزدوج السلسلة J2 بنسب
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية