تركيز وتنقية الجسيمات الفيروسية

خذ معلقاً من الجسيمات الفيروسية المختلطة مع بقايا الخلايا المضيفة.

قم بإجراء عملية الطرد المركزي لترسيب الحطام الأكبر حجماً. اجمع السائل الطافي الذي يحتوي على الجسيمات الفيروسية جنباً إلى جنب مع الحطام الأصغر حجماً.

قم بترشيح الطافي لإزالة ما تبقى من الحطام الأصغر حجماً.

أضف محلولاً ملحياً يحتوي على البولي إيثيلين جلايكول، أو PEG، إلى الراشح. اقلب الأنبوب للمزج ثم قم بالتحضين.

يعمل PEG كعامل ازدحام جزيئي يدفع الجسيمات الفيروسية لتقترب من بعضها البعض، مما يعزز ترسيبها.

وفي الوقت نفسه، يعمل الملح على تعزيز هذا التأثير عن طريق تحييد التنافر الإلكتروستاتيكي بين الجسيمات الفيروسية، مما يسمح لها بالتجمع.

قم بطرد الأنبوب مركزياً لترسيب التجمعات الفيروسية. تخلص من الطافي الغني بـ PEG.

كرر عملية الطرد المركزي، وتخلص من أي سائل طافٍ متبقٍ.

أضف محلولاً منظماً وحضنه مع التحريك لإعادة تعليق الراسب.

قم بتقسيم المعلق الذي يحتوي على الجسيمات الفيروسية إلى حصص صغيرة، واحفظه في درجة حرارة شديدة الانخفاض للحفاظ على السلامة البنيوية للفيروس وقدرته على العدوى.

قم بطرد السائل الطافي الفيروسي مركزياً عند 2000 ×g لمدة 10 دقائق. بعد ذلك، قم بتنقية الوسط الفيروسي عن طريق ترشيحه باستخدام مرشح محقنة بمسامية 0.45 µm ومنخفض الارتباط بالبروتين. بعد ذلك، أضف محلول polyethylene glycol 6000 بتركيز 5X إلى الوسط. اقلب الأنبوب