Name: فأري عزل جزيرة البنكرياس (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 20 s
Description: تعلم عزل جزر لانغرهانس من بنكرياس الفئران باستخدام إنزيم الكولاجيناز وتدرج فيكول للتنقية. تُستخدم هذه الطريقة لتحضير الجزر لزراعتها في نماذج فئران السكري.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

إعداد كولاجيناز <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن خارج كولاجيناز الى 50 مل العازلة العزلة المخروطية وإضافة إلى جعل تركيز النهائي ، كما هو مبين في الجدول أدناه. حل كولاجيناز بواسطة vortexing. (12 + 2 الفئران الفئران الفئران اضافية = 14 × 5 مل / الماوس = 70 مل حل كولاجيناز الكل) (70 مل س 0.5 ملغ / مل أو 0.3 ملغ / مل = 35 ملغ أو 21 ملغ من مجموع كولاجيناز ف) <table style="BORDER-RIGHT: #ddd 1px solid; BORDER-TOP: #ddd 1px solid; BORDER-LEFT: #ddd 1px solid; BORDER-BOTTOM: #ddd 1px solid; TEXT-ALIGN: left;text-align:right;direction:rtl" border="0" width="80%"><tbody><tr><th style="font-size: 12px; border-bottom: #ddd 1px solid; text-align: left"> سلالة </th><th style="font-size: 12px; border-bottom: #ddd 1px solid; text-align: left"> عمر </th><th style="font-size: 12px; border-bottom: #ddd 1px solid; text-align: left"> كولاجيناز P (ملغ / مل) </th><th style="font-size: 12px; border-bottom: #ddd 1px solid; text-align: left"> الوقت (دقيقة) </th></tr><tr><td style="font-size: 12px"> C3H ، BALB / C ، B6 </td><td style="font-size: 12px"> &gt; 12 أسبوعا </td><td style="font-size: 12px"> 0.8 </td><td style="font-size: 12px"> 17 </td></tr><tr><td style="font-size: 12px"> C3H ، BALB / C ، B6 </td><td style="font-size: 12px"> &lt;= 12 أسبوعا </td><td style="font-size: 12px"> 0.5 </td><td style="font-size: 12px"> 13 </td></tr><tr><td style="font-size: 12px"> NOD والنرويج وNON </td><td style="font-size: 12px"> &gt; 12 أسبوعا </td><td style="font-size: 12px"> 0.8 </td><td style="font-size: 12px"> 17 </td></tr><tr><td style="font-size: 12px"> NOD والنرويج وNON </td><td style="font-size: 12px"> &lt;= 12 أسبوعا </td><td style="font-size: 12px"> 0.5 </td><td style="font-size: 12px"> 17 </td></tr></tbody></table> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستغناء 2 مل من محلول كولاجيناز في كل قارورة من الزجاج ومكان على الجليد. تحميل كل حقنة 5 مل مع 3 مل من الإبرة كولاجيناز 30G إضافة ومكان في الجليد (في إعداد هود). </li></ol> نفخ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل التشريح والتضحية الحيوانية خلع عنق الرحم. رش الجسم كله مع 70 ٪ من ETOH ، مما يجعلها رطبة تماما. جعل V - insision ابتداء من المنطقة التناسلية. تدوير الماوس حتى الذيل تواجه بعيدا عنك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأمعاء إلى الجانب الأيسر من الماوس مفتوحة. وسوف يعرض هذا البنكرياس والقناة الصفراوية المشتركة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع المشبك مرقئ على جانبي الأمعاء الصغيرة ، حيث تستنزف القناة الصفراوية ، وترك الحل للجيب صغير للدخول كولاجيناز الأمعاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تضخيم البنكرياس من خلال القناة الصفراوية باستخدام إبرة حقنة 30G و 5 مل تحتوي على 3 مل من محلول كولاجيناز الباردة ، بدءا من المرارة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة البنكرياس من الجسم ووضعه في قارورة تحتوي على siliconized 2 مل من محلول كولاجيناز. وينبغي القيام بهذه الخطوة بسرعة وبطريقة نظيفة قدر الإمكان ، والتقليل من مجموعة من الأنسجة الدهنية والضام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان القنينة على الجليد وكرر الخطوة 3 مع الماوس المقبل. </li></ol> الهضم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ختم كل قنينة ووضعه في الحمام 37 درجة مئوية في المياه. لاحتضان 13-17 دقيقة (الوقت يختلف مع سلالة وعمر الحيوان). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الوقت قد انقضى ، يهز قنينة بقوة. ينبغي أن ينهار البنكرياس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب كل هضم من خلال مصفاة كبيرة في بالوعة العقيمة دورق العقيمة مل 1000 و ماصة بقوة خارج الشاشة مع الغسيل العازلة. صرف 50 في هضم أنابيب conicals مل (3 مل أنبوب pancreata/50 : إذا ن = 12 ، واستخدام ما يكفي من غسل العازلة للتأهل الى النهائي حجم 200 مل والاستغناء عن لأنابيب مل 4x50). وينبغي أن يتم التخفيف السريع على الجليد وغير المرغوب فيها لتجنب جزيرة الهضم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور باستمرار : بدء تشغيل أجهزة الطرد المركزي. عندما تصل إلى 1300 دورة في الدقيقة ، إيقاف تشغيله. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح لطاف ، وترك ~ 5 مل. أن يكون حذرا للغاية حتى لا نضح لبيليه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend بيليه من خلال استغلال بقوة مع يدك ، ثم إضافة 50 مل من غسل العازلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور باستمرار : بدء تشغيل أجهزة الطرد المركزي. عندما تصل إلى 1300 دورة في الدقيقة ، إيقاف تشغيله. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend وبيليه وتغسل مع 5 مل من العازلة الغسيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 5 مل إلى 15 مل المخروطية وتدور باستمرار ، على النحو الوارد أعلاه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح في وطاف ممكن تماما. (قد يتسبب في المخزن المتبقي تغيير كثافة Ficoll). </li></ol> Ficoll نفذ بسرعة. على المدى الطويل Ficoll التعرض سامة بالنسبة للجزر. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد مكسورة تماما حتى قبل بيليه مضيفا ficoll (الأنسجة مفصول من الصعب resuspend في ficoll). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend الكرية في 7 مل من ficoll ، والكثافة 1.108 ، التي vortexing بقوة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طبقة فوق بعضها كثافة 2ml ficoll كل من الكثافة المتبقية في هذا الترتيب : 1.096 ، 1.069 ، 1.037 ثم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور لمدة 15 دقيقة في 1800 دورة في الدقيقة في 4 درجات ، مع قطع! </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التقاط الجزر من الطبقة الثانية باستخدام spoid (ع العقيمةالشافطة lastic). نقل كافة المجموعات إلى 50 مل تحتوي على 25 مل المخروطية ~ العازلة من البرد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل ، على النحو الوارد أعلاه ، و 3 مرات مع العازلة الغسيل (تكرار الخطوة 12-15). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفشوت Resuspend في 20 مل RPMI - 1640 (التي تحتوي على 10 ٪ FCS والبنسلين والستربتوميسين ، HEPES ، MEM - NEAA) ومزيج بلطف. إزالة 100 UL عينة لفرز الأصوات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 100 UL إلى 35 ملم لوحة الشبكة ، التي تحتوي على 1 مل من وسائل الإعلام وdithizone 1 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الجزر المتبقية في RPMI 1640 ، في 37 درجة مئوية ، و 7 ٪ CO 2 حاضنة ، في 160 ملم مع لوحات ما مجموعه 30 مل من وسائل الاعلام / لوحة. <img src="/files/ftp_upload/old/255_2008_8_24_3/255_Figure-01.png" alt="الشكل 1" width="220" height="194" /></li></ol>

فأري عزل جزيرة البنكرياس

Murine Pancreatic Islet Isolation

مرحباً، أنا جريج زوت من مركز جامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو (UCSF) لمرض السكري في مختبر بلوستون، وسأعرض لكم اليوم عملية عزل جزر لانجرهانز من الفأر. تتضمن العملية حقن محلول كولاجيناز في بنكرياس فأر مانح من سلالة C3 H، حيث سنقوم بعد ذلك بإزالة البنكرياس وهضمه، ثم تنقية الجزر باستخدام تدرج فيال، ومن ثم اختيارها يدوياً لنقلها في النهاية إلى كبسولة الكلية لفأر مصاب بالسكري من سلالة NOD، والذي سيكون هو المستقبل.قبل البدء في هذا الإجراء، قمنا بتخفيف محلول ATE في محلول Hanks المنظم المعدل، وقمنا بضبط التركيز بما يتناسب مع سلالة الفئران المستخدمة C3 H. وقد وجدنا أن عملية الهضم تكون أفضل عند استخدام محلول كولاجيناز بتركيز 0.8 mg/mL، وسنستخدم هذا المحلول للحقن في القناة الصفراوية المشتركة لتوسيع البنكرياس. وسيقوم Pavo codre من مركز السكري بتنفيذ الإجراء اليوم؛ حيث سيقوم بحقن المحلول، وفتح جسم الفأر، وكشف الأمعاء، ثم الحقن في القناة الصفراوية المشتركة.سنقوم برش الفأر بالإيثانول لتثبيت الشعر، ومن ثم سنتحقق من أن الفأر قد تم التضحية به بشكل صحيح عن طريق قرص إصبع القدم. سيقوم بافو الآن بفتح الفأر وكشف الأمعاء والبنكرياس عن طريق إجراء شق في الخط الناصف. كما سيتم قطع الحجاب الحاجز للتأكد من التضحية بالفأر.قبل أن نبدأ، أود أن أشير إلى بعض التراكيب الهامة. تقع المعدة هنا، حيث يتصل بها البنكرياس من

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

تحقيق الجودة العالية وكمية مناسبة من الجزر الإنسان هي واحدة من أبرز الشروط لنجاح زرع جزيرة. في هذا الفيديو ، ونحن تصف خطوة بخطوة لإجراءات العزل جزيرة البنكرياس الإنسان (الجزء الأول : الهضم ، وجمع من نسيج البنكرياس) باستخدام طريقة تعديل الآلي.

الإنسان عزل جزيرة البنكرياس : الجزء الأول : الهضم ومجموعة من الأنسجة البنكرياس

تحقيق الجودة العالية وكمية مناسبة من الجزر الإنسان هي واحدة من أبرز الشروط لنجاح زرع جزيرة. في هذا الفيديو ، ونحن تصف خطوة بخطوة لإجراءات العزل جزيرة البنكرياس الإنسان (الجزء الثاني : تنقية الثقافة والجزر البشرية) باستخدام أسلوب تعديل الآلي.

الإنسان عزل جزيرة البنكرياس : الجزء الثاني : تنقية الثقافة والإنسان من الفشوت

يوصف وصفا مفصلا لعزل جزيرة الماوس باستخدام تقنية في كيفية تركيب الكانيولا في البنكرياس القنوي الموقع ونضح من مجموعة من تنقية الأنزيم البروتيني كولاجيناز ومحايدة.

الماوس جزيرة من العزلة انجرهانز باستخدام مزيج من كولاجيناز تنقية والبروتياز متعادلة

جزر البنكرياس ، وتسمى أيضا جزر لانجرهانز ، هي مجموعة من خلايا الغدد الصماء التي تنتج هرمونات لتنظيم الجلوكوز والوظائف البيولوجية المهمة الأخرى. يشرح هذا البروتوكول طريقة لعزل جزر البنكرياس عن طريق نشر الكولاجيناز أولا عبر أمبولا فاتر لهضم أنسجة البنكرياس الخارجية والطرد المركزي المتدرج المبسط لتنقية الجزر من الفئران.

عزل جزر البنكرياس من خلال نضح الكولاجيناز: طريقة إنزيمية لعزل خلايا جزر البنكرياس

نقدم هنا بروتوكولا لعزل الجزر الصغيرة عن نموذج الفأر لمرض السكري من النوع 2 ، Leprdb وتفاصيل اختبار الخلايا الحية لقياس إفراز الأنسولين من الجزر السليمة التي تستخدم 2 مجهر فوتون.

Lepr<sup&gt; ديسيبل</sup&gt; نموذج الفأر من النوع 2 من مرض السكري: البنكرياس عزل جزيرة وتعيش خلية 2 فوتون التصوير من الجزر سليمة

تحديات بالغة الأهمية للبحث ميداني مرض السكري لفهم الآليات الجزيئية التي تنظم جزيرة تكرار β خلايا وتطوير طرق لتحفيز تجديد خلايا بيتا. هنا طريقة فحص عالية المحتوى لتحديد وتقييم وقدم النشاط ودعم تكرار β-خلية من جزيئات صغيرة.

والمحتوى العالي<em&gt; في المختبر</em&gt; البنكرياس جزيرة β خلايا النسخ المتماثل منصة ديسكفري

نحن تصف بروتوكول هنا لعزل الجزر سليمة من الفئران حديثي الولادة. تم هضمها بنكرياسات جزئيا مع كولاجيناز، تليها الغسيل وقطف اليد. ويمكن الحصول على 80 مجموعات جزيرة في البنكرياس من الفئران الوليدة، والتي هي مناسبة لعدة دراسات خلايا البنكرياس - 20.

عزل فعال من الجزر وظيفية من الأطفال حديثي الولادة البنكرياس ماوس

وصف بروتوكول عزل الجزيرة هذا مسارًا جديدًا لحقن الكولاجين لهضم الأنسجة الخارجية وإجراء تدرج مبسط لتنقية الجزر من الفئران. وهو ينطوي على الهضم الأنزيمي، فصل التدرج / تنقية، ومجموعة انتقاء اليد. يمكن أن ينتج عن العزل الناجح 250-350 جزيرة عالية الجودة وكاملة التشغيل لكل ماوس.

بروتوكول بسيط عالي الكفاءة لعزل الجزيرة البنكرياسية عن الفئران

نقدم هنا بروتوكولا لعزل خلايا البنكرياس جزيرة الماوس لفحص عروض توضيحية روس قبل xenobiotics بغية تحديد المواد الكيميائية إكسينوبيوتيك ديابيتوجينيك المحتملة.

لفحص يستند إلى الخلية جزيرة البنكرياس مورين للمواد الكيميائية البيئية ديابيتوجينيك

هنا ، نقدم بروتوكولا للتصوير وقياس ديناميات الكالسيوم في الخلايا غير المتجانسة السكان ، مثل خلايا جزيرة البنكرياس. يتم تسليم الصحفيين الفلورسنت إلى الطبقة الطرفية من الخلايا داخل الجزيرة ، والتي يتم بعد ذلك التعبئة والتصوير ، ويتم اجراء تحليل لكل خليه من ديناميات كثافة الفلورية.

تصوير ديناميات الكالسيوم في السكان الفرعيين من خلايا الفئران جزيرة البنكرياس

طورت هذه الدراسة طريقة مبسطة لاستخراج الجزر الأولية الوظيفية والخلايا الأسينارية بكفاءة من بنكرياس الفأر، مما يوفر أداة قيمة لدراسة التواصل بين الخلايا في مسببات مرض السكري الحاد الناتج عن التهاب البنكرياس.

طريقة بسيطة وسريعة للعزل المتزامن للجزر الأولية وخلايا البنكرياس الأولية من الفئران

تعلم عزل جزر لانغرهانس من بنكرياس الفئران باستخدام إنزيم الكولاجيناز وتدرج فيكول للتنقية. تُستخدم هذه الطريقة لتحضير الجزر لزراعتها في نماذج فئران السكري.

فأري عزل جزيرة البنكرياس

استكشف المزيد من الفيديوهات