Name: فأري عزل جزيرة البنكرياس (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 20 s
Description: تعلم عزل جزر لانغرهانس من بنكرياس الفئران باستخدام إنزيم الكولاجيناز وتدرج فيكول للتنقية. تُستخدم هذه الطريقة لتحضير الجزر لزراعتها في نماذج فئران السكري.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

إعداد كولاجيناز <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن خارج كولاجيناز الى 50 مل العازلة العزلة المخروطية وإضافة إلى جعل تركيز النهائي ، كما هو مبين في الجدول أدناه. حل كولاجيناز بواسطة vortexing. (12 + 2 الفئران الفئران الفئران اضافية = 14 × 5 مل / الماوس = 70 مل حل كولاجيناز الكل) (70 مل س 0.5 ملغ / مل أو 0.3 ملغ / مل = 35 ملغ أو 21 ملغ من مجموع كولاجيناز ف) <table style="BORDER-RIGHT: #ddd 1px solid; BORDER-TOP: #ddd 1px solid; BORDER-LEFT: #ddd 1px solid; BORDER-BOTTOM: #ddd 1px solid; TEXT-ALIGN: left;text-align:right;direction:rtl" border="0" width="80%"><tbody><tr><th style="font-size: 12px; border-bottom: #ddd 1px solid; text-align: left"> سلالة </th><th style="font-size: 12px; border-bottom: #ddd 1px solid; text-align: left"> عمر </th><th style="font-size: 12px; border-bottom: #ddd 1px solid; text-align: left"> كولاجيناز P (ملغ / مل) </th><th style="font-size: 12px; border-bottom: #ddd 1px solid; text-align: left"> الوقت (دقيقة) </th></tr><tr><td style="font-size: 12px"> C3H ، BALB / C ، B6 </td><td style="font-size: 12px"> &gt; 12 أسبوعا </td><td style="font-size: 12px"> 0.8 </td><td style="font-size: 12px"> 17 </td></tr><tr><td style="font-size: 12px"> C3H ، BALB / C ، B6 </td><td style="font-size: 12px"> &lt;= 12 أسبوعا </td><td style="font-size: 12px"> 0.5 </td><td style="font-size: 12px"> 13 </td></tr><tr><td style="font-size: 12px"> NOD والنرويج وNON </td><td style="font-size: 12px"> &gt; 12 أسبوعا </td><td style="font-size: 12px"> 0.8 </td><td style="font-size: 12px"> 17 </td></tr><tr><td style="font-size: 12px"> NOD والنرويج وNON </td><td style="font-size: 12px"> &lt;= 12 أسبوعا </td><td style="font-size: 12px"> 0.5 </td><td style="font-size: 12px"> 17 </td></tr></tbody></table> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستغناء 2 مل من محلول كولاجيناز في كل قارورة من الزجاج ومكان على الجليد. تحميل كل حقنة 5 مل مع 3 مل من الإبرة كولاجيناز 30G إضافة ومكان في الجليد (في إعداد هود). </li></ol> نفخ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل التشريح والتضحية الحيوانية خلع عنق الرحم. رش الجسم كله مع 70 ٪ من ETOH ، مما يجعلها رطبة تماما. جعل V - insision ابتداء من المنطقة التناسلية. تدوير الماوس حتى الذيل تواجه بعيدا عنك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأمعاء إلى الجانب الأيسر من الماوس مفتوحة. وسوف يعرض هذا البنكرياس والقناة الصفراوية المشتركة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع المشبك مرقئ على جانبي الأمعاء الصغيرة ، حيث تستنزف القناة الصفراوية ، وترك الحل للجيب صغير للدخول كولاجيناز الأمعاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تضخيم البنكرياس من خلال القناة الصفراوية باستخدام إبرة حقنة 30G و 5 مل تحتوي على 3 مل من محلول كولاجيناز الباردة ، بدءا من المرارة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة البنكرياس من الجسم ووضعه في قارورة تحتوي على siliconized 2 مل من محلول كولاجيناز. وينبغي القيام بهذه الخطوة بسرعة وبطريقة نظيفة قدر الإمكان ، والتقليل من مجموعة من الأنسجة الدهنية والضام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان القنينة على الجليد وكرر الخطوة 3 مع الماوس المقبل. </li></ol> الهضم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ختم كل قنينة ووضعه في الحمام 37 درجة مئوية في المياه. لاحتضان 13-17 دقيقة (الوقت يختلف مع سلالة وعمر الحيوان). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الوقت قد انقضى ، يهز قنينة بقوة. ينبغي أن ينهار البنكرياس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب كل هضم من خلال مصفاة كبيرة في بالوعة العقيمة دورق العقيمة مل 1000 و ماصة بقوة خارج الشاشة مع الغسيل العازلة. صرف 50 في هضم أنابيب conicals مل (3 مل أنبوب pancreata/50 : إذا ن = 12 ، واستخدام ما يكفي من غسل العازلة للتأهل الى النهائي حجم 200 مل والاستغناء عن لأنابيب مل 4x50). وينبغي أن يتم التخفيف السريع على الجليد وغير المرغوب فيها لتجنب جزيرة الهضم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور باستمرار : بدء تشغيل أجهزة الطرد المركزي. عندما تصل إلى 1300 دورة في الدقيقة ، إيقاف تشغيله. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح لطاف ، وترك ~ 5 مل. أن يكون حذرا للغاية حتى لا نضح لبيليه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend بيليه من خلال استغلال بقوة مع يدك ، ثم إضافة 50 مل من غسل العازلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور باستمرار : بدء تشغيل أجهزة الطرد المركزي. عندما تصل إلى 1300 دورة في الدقيقة ، إيقاف تشغيله. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend وبيليه وتغسل مع 5 مل من العازلة الغسيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 5 مل إلى 15 مل المخروطية وتدور باستمرار ، على النحو الوارد أعلاه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح في وطاف ممكن تماما. (قد يتسبب في المخزن المتبقي تغيير كثافة Ficoll). </li></ol> Ficoll نفذ بسرعة. على المدى الطويل Ficoll التعرض سامة بالنسبة للجزر. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد مكسورة تماما حتى قبل بيليه مضيفا ficoll (الأنسجة مفصول من الصعب resuspend في ficoll). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend الكرية في 7 مل من ficoll ، والكثافة 1.108 ، التي vortexing بقوة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طبقة فوق بعضها كثافة 2ml ficoll كل من الكثافة المتبقية في هذا الترتيب : 1.096 ، 1.069 ، 1.037 ثم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور لمدة 15 دقيقة في 1800 دورة في الدقيقة في 4 درجات ، مع قطع! </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التقاط الجزر من الطبقة الثانية باستخدام spoid (ع العقيمةالشافطة lastic). نقل كافة المجموعات إلى 50 مل تحتوي على 25 مل المخروطية ~ العازلة من البرد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل ، على النحو الوارد أعلاه ، و 3 مرات مع العازلة الغسيل (تكرار الخطوة 12-15). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفشوت Resuspend في 20 مل RPMI - 1640 (التي تحتوي على 10 ٪ FCS والبنسلين والستربتوميسين ، HEPES ، MEM - NEAA) ومزيج بلطف. إزالة 100 UL عينة لفرز الأصوات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 100 UL إلى 35 ملم لوحة الشبكة ، التي تحتوي على 1 مل من وسائل الإعلام وdithizone 1 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الجزر المتبقية في RPMI 1640 ، في 37 درجة مئوية ، و 7 ٪ CO 2 حاضنة ، في 160 ملم مع لوحات ما مجموعه 30 مل من وسائل الاعلام / لوحة. <img src="/files/ftp_upload/old/255_2008_8_24_3/255_Figure-01.png" alt="الشكل 1" width="220" height="194" /></li></ol>

فأري عزل جزيرة البنكرياس

Murine Pancreatic Islet Isolation

مرحباً، أنا جريج زوت من مركز جامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو (UCSF) لمرض السكري في مختبر بلوستون، وسأعرض لكم اليوم عملية عزل جزر لانجرهانز من الفأر. تتضمن العملية حقن محلول كولاجيناز في بنكرياس فأر مانح من سلالة C3 H، حيث سنقوم بعد ذلك بإزالة البنكرياس وهضمه، ثم تنقية الجزر باستخدام تدرج فيال، ومن ثم اختيارها يدوياً لنقلها في النهاية إلى كبسولة الكلية لفأر مصاب بالسكري من سلالة NOD، والذي سيكون هو المستقبل.قبل البدء في هذا الإجراء، قمنا بتخفيف محلول ATE في محلول Hanks المنظم المعدل، وقمنا بضبط التركيز بما يتناسب مع سلالة الفئران المستخدمة C3 H. وقد وجدنا أن عملية الهضم تكون أفضل عند استخدام محلول كولاجيناز بتركيز 0.8 mg/mL، وسنستخدم هذا المحلول للحقن في القناة الصفراوية المشتركة لتوسيع البنكرياس. وسيقوم Pavo codre من مركز السكري بتنفيذ الإجراء اليوم؛ حيث سيقوم بحقن المحلول، وفتح جسم الفأر، وكشف الأمعاء، ثم الحقن في القناة الصفراوية المشتركة.سنقوم برش الفأر بالإيثانول لتثبيت الشعر، ومن ثم سنتحقق من أن الفأر قد تم التضحية به بشكل صحيح عن طريق قرص إصبع القدم. سيقوم بافو الآن بفتح الفأر وكشف الأمعاء والبنكرياس عن طريق إجراء شق في الخط الناصف. كما سيتم قطع الحجاب الحاجز للتأكد من التضحية بالفأر.قبل أن نبدأ، أود أن أشير إلى بعض التراكيب الهامة. تقع المعدة هنا، حيث يتصل بها البنكرياس من الأسفل في الاثني عشر ومن الأعلى. هذا هو الكبد حيث نجد المرارة والقناة الصفراوية المشتركة، والتي يمكنكم رؤيتها هنا.لذا، سيقوم بافو بعد ذلك بعزل الأمعاء الدقيقة، وتحديد موضع دخول القناة الصفراوية المشتركة إلى الأمعاء الدقيقة. وبمجرد كشف الأمعاء، نقوم بوضع مشابك على جانبي القناة الصفراوية المشتركة باستخدام مشابك الناموس (mosquito clamps). وقد وجدنا أن هذا يسمح بدخول المزيد من الكولاجينات إلى البنكرياس، بينما تحاول مجموعات أخرى توجيه المشبك فوق القناة الصفراوية المشتركة.لقد وجدنا أن هذه التقنية أفضل في السماح للإنزيم بدخول البنكرياس. هذا إجراء لطيف؛ حيث يجب تجنب تمزيق الأمعاء.يجب السماح للملاقط بالاستقرار برفق على جانبي القناة الصفراوية المشتركة. سنقوم الآن بتحديد موقع المرارة، وبمجرد كشف المرارة، سنستخدمها كدليل لحقن الكولاجيناز في القناة الصفراوية المشتركة. يستخدم باول إبرة مقاس 30 gauge مع سرنجة سعة 5 cc تحتوي على 3 mL من محلول الكولاجيناز.بينما يقوم بإدخال القسطرة في القناة الصفراوية المشتركة، يعمل على توسيع تلك القناة باستخدام محلول الكولاجيناز، ثم يتقدم عبر القناة الصفراوية المشتركة حتى يصل إلى المنطقة القريبة من الأمعاء. وأثناء تقدمه للأسفل، يتم ضخ محاليل الإنزيمات وحقنها في البنكرياس. والآن، بعد أن تمدد البنكرياس بمحلول الكولاجيناز، سيقوم باول بإزالة الملاقط المرقئة، ثم إزالة البنكرياس من الفأر عن طريق فصله بعناية عن الأمعاء.يقوم بإزالته من المعدة. حسناً، ومن ثم باستخدام الطحال كمقبض، يرفع البنكرياس ثم يقصه ببطء عند القناة الصفراوية المشتركة، وهكذا ينتهي الأمر. يتم كشف البنكرياس ثم يُزال الطحال، وهنا يقوم بإزالة النسيج المساريقي المعوي، وبعد ذلك يُوضع البنكرياس في محلول كولاجيناز بتركيز 2 mg/mL داخل قارورة زجاجية معقمة وتوضع مرة أخرى على الثلج.سيتم الآن وضع البنكرياس المعزول الذي وضعناه في القوارير الزجاجية في حمام مائي بدرجة حرارة 37 °C لمدة 17 دقيقة تقريباً. لقد وضعناها في حامل مخروطي سعة 50 mil لضمان عدم طفوها. وبمجرد وضعها في الحمام، يبدأ المؤقت وتبدأ عملية الهضم.بمجرد اكتمال وقت الهضم، تُزال القوارير، ثم يتم رجّها وتفتيتها بلطف. وبمجرد أن تبدأ الأنسجة في التفكك، تُوضع القارورة على الثلج. يوضع مصفاة معقمة فوق بيكر سعة 400 مل يحتوي على محلول غسيل منظم.يُصب ناتج هضم البنكرياس بعناية عبر المصفاة في محلول الغسيل المنظم. ولأغراض العرض التوضيحي، تم إيقاف تشغيل خزانة السلامة ورفع الزجاج الواقي حتى نتمكن من رؤية ما نقوم به. وبمجرد صب ناتج هضم البنكرياس في الكأس، تُشطف القوارير بنفس محلول الغسيل المنظم، ثم يُوضع محلول الغسيل المنظم فوق المصفاة.لدينا محقنة مملوءة بمحلول غسيل منظم. سنستخدمها لغسل النسيج بقوة عبر المصفاة. تكمن الفكرة في تحرير أي عيون سائبة غير مرتبطة بالمصفوفة، مع ترك الأغشية والنسيج غير المهضوم على المصفاة.وعند الانتهاء من غسل النسيج، هذا ما تراه عادةً في نهاية الإجراء. سيتم الآن نقل نسيج البنكرياس الموجود في قاع الأنبوب إلى أنبوبين مخروطيين سعة 50 mil، وسيتم غسل النسيج، ثم خلطه بشكل متجانس، وتوزيعه بالتساوي بحيث نحصل على حجم راسب متساوٍ في كل أنبوب. يتم الآن شطف الكأس بمزيد من محلول الغسل المنظم.يتم شطف الجوانب لضمان استعادة جميع الأنسجة التي دخلت البيكر مرة أخرى. بعد ذلك، يتم توزيع المحتوى بالتساوي بين أنبوبين، بحيث يحتوي كل منهما على 50 mL. ثم تملأ الأنابيب المخروطية حتى الأعلى بـ wash buffer.يتم قلب النسيج عدة مرات ثم يوضع في جهاز طرد مركزي. يتم إجراء عملية تدوير سريعة، حيث يُترك جهاز الطرد المركزي ليصل إلى 1000 RPM ثم يتم إيقاف تشغيله.تكون الأنسجة في هذه المرحلة حساسة للغاية، لذا يجب تجنب ضغطها بشكل مفرط. تُزال الأنابيب، وسنقوم بتكرار خطوة الغسل هذه ثلاث مرات إضافية. هذه هي نهاية الغسلة الثالثة.يتم نقل مكونات الأنبوب المخروطي سعة 50 ml إلى أنبوب مخروطي سعة 15 ml، ثم يتم إجراء عملية الطرد المركزي بسرعة 1000 RPM وبعد ذلك يتم إيقافها. يُزال الطافي ويبدأ الجزء الأول من FI Call. نحن الآن في الخطوة التي حصلنا فيها على الراسب من هضم البنكرياس.سنقوم بإعادة تعليق هذا النسيج بحيث يكون مفككاً جيداً عن الكريات. سنضيف تدرج الكثافة الأول، وهو 1 1 0 8. سنضيف 5 mL إلى كل أنبوب.يتم بعد ذلك خلط الراسب جيداً في كل من التدرجات. من المهم تحقيق توزيع جيد للأنسجة في التدرج الأكثر كثافة. والآن سنقوم بإضافة طبقة بمقدار 2 mL من كثافة 1.096.سنقوم بعد ذلك بإضافة طبقة بسماكة 2 mils بكثافة 1 0 6 9، ثم فوقها طبقة بكثافة 1 0 3 7. من المهم أثناء وضع طبقات الكثافة تجنب خلطها. وبذلك تكون جميع الطبقات قد أضيفت إلى الأنبوب.ويمكنكم رؤية أن هذا هو الجزء العلوي من 1 1 0 8، والجزء العلوي من 9 1 0 9 6، والجزء العلوي من 1 0 6 9 والجزء العلوي من 1 0 3 7. ويمكنكم ملاحظة أن النسيج قد بدأ بالفعل في الانتقال إلى كثافته المناسبة حتى بدون عملية الطرد المركزي الجزئي. يتم رفع سرعة تدرجات الفيال إلى 1800 RPM لمدة 15 دقيقة، وتذكروا إبقاء المكابح متوقفة بعد إخراج الأنابيب من جهاز الطرد المركزي.يمكنكم رؤية نطاق جيد من أنسجة الجزر بين الطبقتين 0 0 9 6 و0 0 7. والآن، يتمت إزالة الطبقة 0 3 7 للتخلص من أي بقايا أنسجة أو DNA قد يكون قد تحرر أثناء المعالجة. وباستخدام ماصة بلاستيكية معقمة، سيقوم الآن بإزالة طبقة الجزر ونقلها إلى أنبوب مخروطي سعة 50 mil يحتوي على 25 mils من محلول الغسيل المنظم.يجب تنفيذ هذه الخطوة بسرعة لأن fol سام لـ eyelets. في الواقع، قمنا بإزالة طبقة 0 6 9 و 0 9 6 بالكامل. يقوم Pavo بقطع الجزء العلوي من ماصة pasture البلاستيكية وشطفها باستخدام محلول الغسيل المنظم.يتم بعد ذلك طرد عينات العيون مركزياً كما فعلنا سابقاً. يتم رفع سرعة جهاز الطرد المركزي إلى 1000 RPM ثم يتم إيقافه وسحب الراشح. تُغسل العيون ثلاث مرات باستخدام وسط الغسيل.لقد انتهينا للتو من عملية عزل جزر لانجرهانس، حيث انتقلنا من مرحلة الهضم إلى تدرج الكثافة وصولاً إلى جزر لانجرهانس المنقاة. وبعد الغسلة الثالثة باستخدام محلول الغسيل المنظم، أعدنا تعليق جزر لانجرهانس في وسط RPMI ووضعناها في طبق زراعة أنسجة. هذه الجزر الآن جاهزة للفحوصات المخبرية (in vitro) أو التحضيرات الحية (in vivo) مثل زراعة جزر لانجرهانس.

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

تحقيق الجودة العالية وكمية مناسبة من الجزر الإنسان هي واحدة من أبرز الشروط لنجاح زرع جزيرة. في هذا الفيديو ، ونحن تصف خطوة بخطوة لإجراءات العزل جزيرة البنكرياس الإنسان (الجزء الأول : الهضم ، وجمع من نسيج البنكرياس) باستخدام طريقة تعديل الآلي.

الإنسان عزل جزيرة البنكرياس : الجزء الأول : الهضم ومجموعة من الأنسجة البنكرياس

تحقيق الجودة العالية وكمية مناسبة من الجزر الإنسان هي واحدة من أبرز الشروط لنجاح زرع جزيرة. في هذا الفيديو ، ونحن تصف خطوة بخطوة لإجراءات العزل جزيرة البنكرياس الإنسان (الجزء الثاني : تنقية الثقافة والجزر البشرية) باستخدام أسلوب تعديل الآلي.

الإنسان عزل جزيرة البنكرياس : الجزء الثاني : تنقية الثقافة والإنسان من الفشوت

يوصف وصفا مفصلا لعزل جزيرة الماوس باستخدام تقنية في كيفية تركيب الكانيولا في البنكرياس القنوي الموقع ونضح من مجموعة من تنقية الأنزيم البروتيني كولاجيناز ومحايدة.

الماوس جزيرة من العزلة انجرهانز باستخدام مزيج من كولاجيناز تنقية والبروتياز متعادلة

جزر البنكرياس ، وتسمى أيضا جزر لانجرهانز ، هي مجموعة من خلايا الغدد الصماء التي تنتج هرمونات لتنظيم الجلوكوز والوظائف البيولوجية المهمة الأخرى. يشرح هذا البروتوكول طريقة لعزل جزر البنكرياس عن طريق نشر الكولاجيناز أولا عبر أمبولا فاتر لهضم أنسجة البنكرياس الخارجية والطرد المركزي المتدرج المبسط لتنقية الجزر من الفئران.

عزل جزر البنكرياس من خلال نضح الكولاجيناز: طريقة إنزيمية لعزل خلايا جزر البنكرياس

نقدم هنا بروتوكولا لعزل الجزر الصغيرة عن نموذج الفأر لمرض السكري من النوع 2 ، Leprdb وتفاصيل اختبار الخلايا الحية لقياس إفراز الأنسولين من الجزر السليمة التي تستخدم 2 مجهر فوتون.

Lepr<sup&gt; ديسيبل</sup&gt; نموذج الفأر من النوع 2 من مرض السكري: البنكرياس عزل جزيرة وتعيش خلية 2 فوتون التصوير من الجزر سليمة

تحديات بالغة الأهمية للبحث ميداني مرض السكري لفهم الآليات الجزيئية التي تنظم جزيرة تكرار β خلايا وتطوير طرق لتحفيز تجديد خلايا بيتا. هنا طريقة فحص عالية المحتوى لتحديد وتقييم وقدم النشاط ودعم تكرار β-خلية من جزيئات صغيرة.

والمحتوى العالي<em&gt; في المختبر</em&gt; البنكرياس جزيرة β خلايا النسخ المتماثل منصة ديسكفري

نحن تصف بروتوكول هنا لعزل الجزر سليمة من الفئران حديثي الولادة. تم هضمها بنكرياسات جزئيا مع كولاجيناز، تليها الغسيل وقطف اليد. ويمكن الحصول على 80 مجموعات جزيرة في البنكرياس من الفئران الوليدة، والتي هي مناسبة لعدة دراسات خلايا البنكرياس - 20.

عزل فعال من الجزر وظيفية من الأطفال حديثي الولادة البنكرياس ماوس

وصف بروتوكول عزل الجزيرة هذا مسارًا جديدًا لحقن الكولاجين لهضم الأنسجة الخارجية وإجراء تدرج مبسط لتنقية الجزر من الفئران. وهو ينطوي على الهضم الأنزيمي، فصل التدرج / تنقية، ومجموعة انتقاء اليد. يمكن أن ينتج عن العزل الناجح 250-350 جزيرة عالية الجودة وكاملة التشغيل لكل ماوس.

بروتوكول بسيط عالي الكفاءة لعزل الجزيرة البنكرياسية عن الفئران

نقدم هنا بروتوكولا لعزل خلايا البنكرياس جزيرة الماوس لفحص عروض توضيحية روس قبل xenobiotics بغية تحديد المواد الكيميائية إكسينوبيوتيك ديابيتوجينيك المحتملة.

لفحص يستند إلى الخلية جزيرة البنكرياس مورين للمواد الكيميائية البيئية ديابيتوجينيك

هنا ، نقدم بروتوكولا للتصوير وقياس ديناميات الكالسيوم في الخلايا غير المتجانسة السكان ، مثل خلايا جزيرة البنكرياس. يتم تسليم الصحفيين الفلورسنت إلى الطبقة الطرفية من الخلايا داخل الجزيرة ، والتي يتم بعد ذلك التعبئة والتصوير ، ويتم اجراء تحليل لكل خليه من ديناميات كثافة الفلورية.

تصوير ديناميات الكالسيوم في السكان الفرعيين من خلايا الفئران جزيرة البنكرياس

طورت هذه الدراسة طريقة مبسطة لاستخراج الجزر الأولية الوظيفية والخلايا الأسينارية بكفاءة من بنكرياس الفأر، مما يوفر أداة قيمة لدراسة التواصل بين الخلايا في مسببات مرض السكري الحاد الناتج عن التهاب البنكرياس.

طريقة بسيطة وسريعة للعزل المتزامن للجزر الأولية وخلايا البنكرياس الأولية من الفئران

تعلم عزل جزر لانغرهانس من بنكرياس الفئران باستخدام إنزيم الكولاجيناز وتدرج فيكول للتنقية. تُستخدم هذه الطريقة لتحضير الجزر لزراعتها في نماذج فئران السكري.

فأري عزل جزيرة البنكرياس

استكشف المزيد من الفيديوهات