Name: تعديل ES / OP9 المشارك الثقافة ينص البروتوكول خصائص محسنة من النسل للدم (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 36 s
Description: اكتشف طريقة تمييز خلايا جذعية جنينية فأرية إلى سلالات دموية باستخدام خلايا OP9 الداعمة. يتيح هذا البروتوكول تقييم كامل للنسل المشتق من ES لدراسة تطور الدم وعيوبه.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نشكر U. Ganapati لإنشاء واختبار خط mStrawberry OP9 الخلية. بالإضافة إلى ذلك ، ونحن نشكر سعادة Shafifor مساعدتها مع الثقافة المشتركة. معتمد من قبل HP الزمالة من المعهد القومي للقلب والرئة والدم (F31HL087714) (HP). مضمون هذا العمل هو فقط من مسؤولية المؤلف ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للمعهد القومي للقلب والرئة والدم أو المعاهد الوطنية للصحة (NIH). يتم اعتماد التدفق الخلوي مرفق الأساسية في جامعة كاليفورنيا من قبل المعاهد الوطنية للصحة (CA - 16042 - 28697 ومنظمة العفو الدولية) ، ومركز السرطان يونسون ، معهد كاليفورنيا للإيدز ، وكلية الطب في جامعة كاليفورنيا.

1. إعداد الخلايا ES <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلايا ES الثقافة وفقا لبروتوكول موحد لخطك خلية معينة. تأكد من أن تعد وفاق خلايا كافية لوحة على الخلايا OP9 mStrawberry لليوم 0 (سيتم مطلي خلايا ES 1x10 في الخلايا لكل سم 3 ^ 2 في يوم 0) </li></ol> 2. إعداد OP9 الخلايا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل تنامي الخلايا OP9 mStrawberry ، وإعداد وسائط النمو OP9 OP - 9 الثقافة خلية متوسطة <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td> الأوراق المالية </td><td> اضرب النهائي. </td><td> الحجم (مل) </td></tr><tr><td> aMEM </td><td></td><td></td><td> 39.5 </td></tr><tr><td> FBS (OP - 9 اختبار) </td><td> 100 ٪ </td><td> 20 ٪ </td><td> 10 </td></tr><tr><td> L - الجلوتامين </td><td> 100X (200MM) </td><td> 2mm و </td><td> 0.5 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 50mL </td></tr></tbody></table> مخزن عند 4 درجة مئوية ، واستخدام في غضون أسبوع من التحضير </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من أجل الحفاظ على mStrawberry OP9 الخلايا ، يجب تغيير وسائل الاعلام كل يوم 2 وينبغي subcultured الخلايا قبل الوصول إلى الخلايا confluency (ثقافة فرعية في 70-90 ٪ confluency). ونمت أبدا الثقافات mStrawberry الخلية OP9 تتجاوز 90 ٪ confluency لأن هذا سيؤدي بهم إلى التمايز في الخلايا الشحمية. انظر الشكل 3. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثقافة فرعية الخلايا خلايا غسل 2X مع برنامج تلفزيوني (أو مع 1X PBS + 0.1 ٪ مع التربسين 1X - EDTA) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة قبل تحسنت بنسبة 0.1 ٪ التربسين - EDTA عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق (أو حتى فصل الخلايا) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يكون فصل الخلايا ، إضافة OP - 9 المتوسطة النمو. نقل الخلايا إلى أنبوب 50mL المخروطية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلايا بيليه في 300 x ج لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. تجاهل طاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend خلايا جديدة في وسائط النمو mStrawberry OP9 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة خلايا في مناطق ذات كثافة أدنى من الخلايا 4 10 / سم 2 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنمو الخلايا لmStrawberry OP9 confluency اعتبارا من 3 أيام قبل يوم اللازمة للخلايا ES شارك في زراعة (اليوم 0 ، يوم 5 أو Day8 / 9 من التجربة) </li></ol></li></ol> 3. ES / mStrawberry OP9 المشارك الثقافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد وسائل الاعلام التفريق المشارك الثقافة <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td> الأوراق المالية </td><td> نهائي </td><td> الحجم (مل) </td></tr><tr><td> aMEM </td><td></td><td></td><td> 39.5 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> 100 ٪ </td><td> 20 ٪ </td><td> 10 </td></tr><tr><td> L - الجلوتامين </td><td> 200MM </td><td> 2mm و </td><td> 0.5 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 50mL </td></tr></tbody></table></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> mStrawberry OP9 الخلايا (اليوم -3) <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثقافة ثانوية دائما OP9 -3 خلايا في اليوم ، بحيث يكون لديك طبقات من الخلايا متموجة OP9 mStrawberry ل 0 يوم الثقافة المشتركة. انظر الشكل 4B. لوحة mStrawberry OP9 الخلايا في 1x10 4 / سم 2 للconfluency في اليوم 0. تأكد من خلايا فرعية اضافية لليوم 5 ويوم 09/08 لاستمرار ثقافة المشترك. </li></ol></li><li class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> ES / mStrawberry OP9 شارك في انشاء ثقافة (يوم 0) <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل خلايا ES 2X مع برنامج تلفزيوني </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعرض للتريبسين الخلايا وفاق مع 0.25 ٪ قبل تحسنت التربسين - EDTA ، يحضن لمدة 37 درجة مئوية @ 5min </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الوسائط تمايز الثقافة المشارك للخلايا </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيليه الخلايا ES في 400xg ، 5 - 7min ، RT. تجاهل طاف </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend الخلايا في التمايز وسائل الاعلام المشارك الثقافة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة وسائل الاعلام من الخلايا OP9 mStrawberry </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الوسائط تمايز المشارك الثقافة قوارير OP9 mStrawberry </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة خلايا ES 1x10 3 / سم 2 إلى قارورة من الخلايا OP9 mStrawberry. احتضان خلايا عند 37 درجة مئوية ، 5 ٪ CO 2 مع الرطوبة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> mStrawberry OP9 الخلايا (يوم 2) <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> mStrawberry OP9 فرعية بحيث يكون لديك طبقات من الخلايا متموجة OP9 mStrawberry ليوم 5 من الثقافة المشتركة. لوحة mStrawberry OP9 الخلايا في 1x10 4 / سم 2 للconfluency في يوم 5 (كما في الخطوة 3.2). تأكد من خلايا فرعية اضافية ليوم 8 / 9 ، إذا لزم الأمر (كما في الخطوة 2.2). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ES / mStrawberry OP9 المشترك الثقافة (اليوم 3) <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة بعناية متوسطة من الثقافة المشتركة واستبدال الطازجة متوسطة التمايز المشارك الثقافة </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ES / mStrawberry OP9 المشترك الثقافة (يوم 5) <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل بعناية شارك في برنامج تلفزيوني مع الثقافات 2X </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعرض للتريبسين الخلايا مع 0.25 ٪ قبل تحسنت التربسين - EDTA </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قارورة غسل الخلايا قبالة مع وسائل الاعلام التفريق المشارك الثقافة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيليه في الخلايا 400xg ، 7min ، RT. تجاهل طاف </li><li style=";text-align:right;direction:rtl">إضافة الوسائط تمايز الثقافة المشارك للخلايا. استخدام إبرة عيار 21 bluntended resuspend إلى الخلايا ، وضمان لتعليق خلية واحدة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد الخلايا باستخدام عدادة الكريات. يجب أن يكون 100-150 أضعاف زيادة في عدد الخلايا ES من اليوم 0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة البذور 6.48x10 4 / سم 2 -- 7.76x10 4 / سم 2 المشترك لثقافة الخلايا في طبقة جديدة من متموجة ، وخلايا OP9 mStrawberry </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اليوم 5 - المقايسات المتبقية يمكن استخدام المشترك لتحليل الخلايا الثقافة التدفق الخلوي ، cytopreps (30K الخلايا) ، المقايسات رقاقة ، الخ. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ES / mStrawberry OP9 المشترك الثقافة (يوم 09/08 ويوم 12) <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة التفرقة وسائل الاعلام من القارورة وحفظها. غسل المونولاير مع 1X PBS لإزالة الخلايا المكونة للدم في التعليق. لا طرد الخلايا المكونة للدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعرض للتريبسين الخلايا الملتصقة مع 0.25 ٪ قبل تحسنت التربسين - EDTA </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قارورة غسل الخلايا قبالة مع وسائل الاعلام وفاق وتمايز الخلايا المكونة للدم إضافة إلى العثور عليها في تعليق = </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيليه في الخلايا 400xg ، 7min ، RT. تجاهل طاف </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة المشارك ثقافة الإعلام تمايز أو برنامج تلفزيوني إلى الخلايا. استخدام إبرة عيار 21 bluntended resuspend إلى الخلايا وحيدة لضمان لعدد الخلايا الخلية تعليق باستخدام عدادة الكريات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لا يمكن أن تستمر المشاركة في الثقافة لمدة 14 يوما لتقييم الأسلاف لدم أكثر نضجا من قبل خلايا شارك في ثقافة إعادة البذر على طبقة جديدة من متموجة ، وخلايا OP9 mStrawberry في يوم 8 أو 9 و ثم مرة أخرى في يوم 12. إعادة البذور المحسنة عدد الخلايا على أساس استرداد الخلية المطلوبة ليوم الفحص. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم ES المستمدة من سلالة (يوم 14/01). ويمكن تقييم ES - مشتقة ذرية في أي يوم من الثقافة المشتركة التي تدفق فرز الخلايا السلبية mStrawberry (ES - مشتقة النسل). <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة التفرقة وسائل الاعلام من القارورة وحفظها. غسل المونولاير مع 1X PBS لإزالة الخلايا المكونة للدم في التعليق. لا إرم من الخلايا المكونة للدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعرض للتريبسين الخلايا الملتصقة مع 0.25 ٪ قبل تحسنت التربسين - EDTA </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قارورة غسل الخلايا قبالة مع وسائل الاعلام التفريق المشارك ثقافة وإضافة إلى الخلايا المكونة للدم وجدت في تعليق </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيليه في الخلايا 400xg ، 7min ، RT. تجاهل طاف </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend الخلايا مع عيار 21 إبرة bluntended والعد </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن ذرية ES - مشتقة (الخلايا السلبية mStrawberry) يكون تدفق فرزها من الخلايا mStrawberry OP9 إيجابية. ويمكن عندئذ ذرية ES - مشتقة يتسم تحليل التدفق الخلوي ، cytopreps ، المقايسات رقاقة ، الخ. </li></ol></li></ol> 4. ممثل النتائج : <img src="/files/ftp_upload/2559/2559fig1.jpg" alt="الشكل 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"> الشكل 1. ES / mStrawberry OP9 المشارك ثقافة النظام. مختبر لدينا يستخدم في المختبر ES نظام المشاركة في زراعة الخلايا المكونة للدم لنموذج التنمية. في هذا النظام المشترك والثقافة ، وخلايا ES يفرق ، في hemangioblasts في Day5 ، عند وضعه على طبقة من الخلايا متموجة OP9 mStrawberry. كما شارك في العائدات والثقافة ، والسلائف للدم موجودة في يوم 8 ، في حين الأنساب المتباينة للدم عضال تظهر قبل يوم 14. تشير الأسهم يوما من تمايز عند الركض من ES - مشتقة ذرية على طبقات جديدة من الخلايا متموجة OP9 mStrawberry في الضرورة. <img src="/files/ftp_upload/2559/2559fig2.jpg" alt="الشكل 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 2"> الشكل 2. تمايز الخلايا السليمة وفاق. هي خلايا ES المصنفة على طبقة من mStrawberry OP9 متكدسة في اليوم 0. ES - مشتقة تبدأ ذرية لتصبح مرئية في يوم 3 من التمايز ، مع وفاق المستمدة من سلالة تبدو وكأنها كتلة من الخلايا مع حدود محددة أو بداية لتشكيل نمط دوارة. ينبغي Hemangioblasts ، والتي هي مشتركة تمهيدا لأرومية متوسطة الأنساب البطانية والمكونة للدم ، كما تظهر تراكمت جدلات من الخلايا في يوم 5. لاشتراكهما في الثقافة فترات أطول من خمسة أيام ، ينبغي ES - مشتقة ذرية تظهر مجموعات من الخلايا المكونة للدم. سنتين إلى أربع مجموعات الخلية ، في يوم 6 / 7 ، ينبغي أن تظهر وتنمو في مجموعات أكبر خلية يوم 09/08 من الثقافة المشتركة. كما تم العثور على سلالة أخرى مشتقة ES بإحكام إلى طبقة الخلايا اللحمية ملتصقة. <img src="/files/ftp_upload/2559/2559fig3.jpg" alt="الشكل 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 3"> الشكل 3. غير ناجحة تمايز الخلايا ES النتائج من هذه الثقافة المشتركة تعكس سوء تمايز الخلايا ES. لاحظ كيف ذرية ES - مشتقة لا تظهر في نمط دوارة في اليوم 5. لعدم وجود خلايا في نمط دوارة يشير تشكيل أرومة وعائية غير لائق. إذا أرومة وعائية لا تتطور بشكل صحيح ، ثم واصل المشاركة في الثقافة سيؤدي إلى توقف تمايز النسب المكونة للدم. يجب التخلص من التعاون مع الثقافات تشكيل أرومة وعائية غير لائق. <img src="/files/ftp_upload/2559/2559fig4.jpg" alt="الشكل 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 4"> الشكل 4. mStrawberry الثقافات الخلية OP9 (A) هي subcultured mStrawberry OP9 في الخلية70-90 ٪ confluency. (B) للحصول على التمييز الصحيح ، وتوضع الخلايا وآله وفاق وفاق المستمدة متكدسة على طبقة من الخلايا بشكل مفرط OP9 mStrawberry. <img src="/files/ftp_upload/2559/2559fig5.jpg" alt="الشكل 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 5"> الشكل 5. ممثل ES / mStrawberry OP9 ملف تدفق المشارك ثقافة جميع ذرية ES - مشتقة من خلايا mStrawberry السلبية ، ويمكن فرزها من تدفق الخلايا OP9 mStrawberry. تم تحديد mStrawberry بوابة الخلية السلبية باستخدام ES/OP9 التقليدية المشترك الثقافة.

<ol><li>Baron, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+origins+of+mammalian+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Hematol%22%5BJournal%5D)">Embryonic origins of mammalian hematopoiesis.</a> Exp Hematol. 31, 1160-1160 (2003).</li>
<li>Baron, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+patterning+of+the+mouse+embryo%3A+implications+for+hematopoietic+commitment+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Hematol%22%5BJournal%5D)">Early patterning of the mouse embryo: implications for hematopoietic commitment and differentiation.</a> Exp Hematol. 33, 1015-1015 (2005).</li>
<li>Baron, M. H., Fraser, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+specification+of+early+hematopoiesis+in+the+mammal%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Hematol%22%5BJournal%5D)">The specification of early hematopoiesis in the mammal.</a> Curr Opin Hematol. 12, 317-317 (2005).</li>
<li>Desbaillets, I., Ziegler, U., Groscurth, P., Gassmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryoid+bodies%3A+an+in+vitro+model+of+mouse+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Embryoid bodies: an in vitro model of mouse embryogenesis.</a> Exp Physiol. 85, 645-645 (2000).</li>
<li>Ganapati, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+notch+signaling+in+normal+and+neoplastic+hematopoiesis%3A+global+gene+expression+profiling+in+response+to+activated+notch+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Modeling notch signaling in normal and neoplastic hematopoiesis: global gene expression profiling in response to activated notch expression.</a> Stem Cells. 25, 1872-1872 (2007).</li>
<li>Hogan, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHogan%2C+B+%22Manipulating+the+mouse+embryo+%3A+a+laboratory+manual%22">Manipulating the mouse embryo : a laboratory manual</a>. , 2nd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Plainview, N.Y. (1994).</li>
<li>Keller, G., Kennedy, M., Papayannopoulou, T., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+commitment+during+embryonic+stem+cell+differentiation+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic commitment during embryonic stem cell differentiation in culture.</a> Mol Cell Biol. 13, 473-473 (1993).</li>
<li>Keller, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+differentiation+of+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">In vitro differentiation of embryonic stem cells.</a> Curr Opin Cell Biol. 7, (1995).</li>
<li>Nakano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphohematopoietic+development+from+embryonic+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lymphohematopoietic development from embryonic stem cells in vitro.</a> Semin Immunol. 7, 862-862 (1995).</li>
<li>Nakano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+development+of+hematopoietic+system+from+mouse+embryonic+stem+cells%3A+a+new+approach+for+embryonic+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Hematol%22%5BJournal%5D)">In vitro development of hematopoietic system from mouse embryonic stem cells: a new approach for embryonic hematopoiesis.</a> Int J Hematol. 65, 1-1 (1996).</li>
<li>Nakano, T., Kodama, H., Honjo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+lymphohematopoietic+cells+from+embryonic+stem+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Generation of lymphohematopoietic cells from embryonic stem cells in culture.</a> Science. 265, 1098-1098 (1994).</li>
<li>Turksen, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTurksen%2C+K+%22Embryonic+stem+cells+%3A+methods+and+protocols%22">Embryonic stem cells : methods and protocols</a>. , Humana Press. Totowa, N.J. (2002).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

تمايز الخلايا السليمة ES متكدسة على طبقة من الخلايا OP9 mStrawberry النتائج في إنتاج hemangioblasts + Flk1 في يوم 5 من الثقافة المشتركة. وينبغي أن تظهر Hemangioblasts مكدسة ما يصل جدلات من الخلايا ، كما لوحظ في الشكل 1. للفترة المتبقية من الثقافة المشتركة ، وينبغي مرئية ES - مشتقة ذرية تظهر مجموعات من الخلايا المكونة للدم (الشكل 1). في 7 / Day6 ينبغي كتل الخلية 2-4 تظهر وتنمو في مجموعات أكبر خلية (على حد سواء وملتصقة في التعليق) من يوم 09/08 من الثقافة المشتركة. كما تم العثور على سلالة أخرى مشتقة ES بإحكام داخل طبقة الخلايا اللحمية ملتصقة. وإن لم تكن مدرجة في البروتوكول ، من الأهمية بمكان قبل اختبار FBS المستخدمة في وفاق متوسط ​​النمو ، والنمو OP9 mStrawberry سائل الإعلام وفاق / mStrawberry وسائل الاعلام التفريق OP9. اختبار المصل بشكل صحيح وينبغي ضمان النمو السليم لخلايا OP9 mStrawberry ، وكذلك ، والتمايز للخلايا السليمة وفاق في الثقافة المشتركة حتى يوم 5 من التمايز. كبديل أو بالإضافة إلى خلايا OP9 mStrawberry ، يمكن المشع OP9 الخلايا ، في 8000 راد ، قبل البذر في confluency (7.8x10 4 خلايا / سم 2). تشعيع الخلايا OP9 يسمح للقضاء على تكرار الخطوات replating ، وكذلك ، ويسمح للقضاء التام تقريبا من العمر ، وتلويث OP9 الخلايا من المقايسات المصب. وكانت المهندسة OP9 الخلايا في التعبير عن بروتين mStrawberry بواسطة transducing OP9 الخلايا مع 3ug/mL من mStrawberry ناقلات lentiviral معربا عن إطار السيطرة على المروج CMV (pRRLsin - CMV النواقل ، UCLA ناقلات الأساسية). معيار ES/OP9 ثقافة بروتوكولات التعاون يستتبع وضع الخلايا ES في الصعود إلى طبقة الخلايا OP9 متموجة ، وكذلك ، وهي خطوة replating يوم 5 من أجل الحد من العمر ، وتلويث OP9 مرور الخلايا من الخلية. بالإضافة إلى ذلك ، تتم إزالة الخلايا المكونة للدم فقط وجدت في تعليق لتقييم ES - مشتقة ذرية. ومع ذلك ، مع خطوة على حد سواء replating وحصاد الخلايا تعليق واحد فقط من المحتمل يفتقد عددا كبيرا من البلدان النامية وفاق المستمدة من الخلايا المكونة للدم. هذه المسألة هامة للتصدي ليصبح عند محاولة توصيف للدم العيوب المرتبطة بخطوط ES خروج المغلوب. من أجل الالتفاف على هذه المشكلة تستخدم مختبرنا معدلة شارك في الثقافة ، من خلال استخدام mStrawberry ، معربا عن OP9 الخلايا. هذا يؤكد أن يتم نقل جميع ذرية ES لاستمرار التعاون الثقافة في يوم 5 ، وبالنسبة لموسم جني جميع ذرية ES - مشتقة عن المقايسات المصب. هذا التعديل يوفر أدوات مفيدة في تقييم وتوصيف للدم المستمدة من سلالة بشرية وخطوط ES الماوس. هذا ES - mStrawberry OP9 يلخص نموذج التعاون ثقافة مختلف مراحل بدائية ونهائية تكون الدم. في دراسة المراحل الأولى من التنمية للدم ، كثير من الناس استخدام BL - CFC (مثل انفجار الخلية تشكيل مستعمرة) الفحص ، التي تقيم في تطوير أرومة وعائية من الخلية ES. في حين أن الفحص BL - CFC هي أداة مفيدة للدم عند التحقيق في التنمية في وقت مبكر ، يسلك mStrawberry - ES شارك في الثقافة أنظمة المرافق زيادة لأنها تسمح لتقييم أرومة وعائية ، وكذلك ، الأنساب للدم مزيد من الكبار. وقد أظهرت الأعمال السابقة باستخدام OP9/ES التقليدية والبروتوكولات تمايز EB أن هناك عوامل إضافية ربما من الضروري ، مثل overexpression من HoxB4 ، من أجل استخلاص طويلة الأجل إعادة إسكانها الخلايا الجذعية المكونة للدم في المختبر. أعمال إضافية ضرورية لتقييم ما إذا كانت سلبية mStrawberry وفرزها وفاق المستمدة من السكان تحتوي على الخلايا الجذعية المكونة للدم الحقيقي.

OP - 9 متوسطة صيانة مكونات الخلية الأسهم <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> رقم كتالوج </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> aMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12571-063 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> أوميغا العلمية </td><td> FB01 </td><td> قبل اختبار </td></tr><tr><td> L - الجلوتامين </td><td> Cellgro </td><td> 25-005 - CI </td><td> 200nM </td></tr><tr><td> التربسين - EDTA </td><td> وقف سيل تكنولوجيز </td><td> 07901 </td><td></td></tr></tbody></table> ES/OP-9 متوسطة مكونات تمايز الخلايا الأسهم <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> رقم كتالوج </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> aMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12571-063 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> Hyclone </td><td> SH30070 </td><td> قبل اختبار </td></tr><tr><td> L - الجلوتامين </td><td> Cellgro </td><td> 25-005 - CI </td><td> 200MM </td></tr><tr><td> PBS (بدون الكالسيوم والمغنيسيوم 2 + 2 +) </td><td> Cellgro </td><td> 21-031 - CV </td><td></td></tr><tr><td> التربسين - EDTA </td><td> وقف سيل تكنولوجيز </td><td> 07901 </td><td></td></tr></tbody></table>

تعديل es / op9 المشارك الثقافة ينص البروتوكول خصائص محسنة من النسل للدم

Modified ES / OP9 Co-Culture Protocol Provides Enhanced Characterization of Hematopoietic Progeny

وتمايز الخلايا في المختبر من أجل التوصل إلى وفاق مصير الخلايا المكونة للدم ومفيدة عند دراسة السكان الخلية التي يصعب الوصول إليها في الجسم الحي والتي تتميز عن أقرب الجينات المسؤولة عن تكون الدم ، دون الاضطرار إلى التعامل مع lethalities الجنينية. وقد صممت في الأصل المشترك ES/OP9 ثقافة النظام لإنتاج الذرية المكونة للدم ، من دون إنتاج أكثر من الضامة ، كما هو اشتقاق خلايا انسجة OP9 خط من calvaria تصخر العظم من الفئران الطافرة التي تفتقر الوظيفية M - CSF. يمكن استخدام النظام في المختبر المشترك ES/OP9 الثقافة من أجل التنمية ألخص للدم في وقت مبكر. عندما مثقف على OP9 الخلايا اللحمية والخلايا ES تفرق في hemangioblasts + Flk - 1 ، أسلاف المكونة للدم ، وتنضج في النهاية ، الأنساب المتباينة عضال. المعيار المشترك ES/OP9 ثقافة يستتبع بروتوكول موضع وفاق على خلايا طبقة متموجة من OP9 الخلايا ، وكذلك دورية replating الخطوات من أجل إزالة القديمة ، وتلويث OP9 الخلايا. وعلاوة على ذلك ، والبروتوكولات الحالية تنطوي على تقييم فقط على الخلايا المكونة للدم وجدت في تعليق وليست الأمثل لتقييم ES - مشتقة ذرية في كل يوم من التمايز. ومع ذلك ، مع الخطوات replating وحصاد الخلايا تعليق واحد فقط من المحتمل يفتقد جزء كبير من وفاق المستمدة من سلالة الخلايا المكونة للدم والبلدان النامية. هذه المسألة هامة للتصدي ليصبح عند محاولة توصيف للدم العيوب المرتبطة بخطوط ES خروج المغلوب. نحن هنا وصف تعديل ES / mStrawberry OP9 شارك في الثقافة ، والذي يسمح للقضاء على الخلايا من تلويث OP9 المقايسات المصب. هذا الأسلوب يسمح للتقييم الشامل لجميع ذرية ES - مشتقة في جميع أيام الثقافة المشتركة ، مما أسفر عن نمط التمييز المكونة للدم ، والذي يتوافق بشكل مباشر للنمط التمايز للدم لاحظ داخل الجنين.

mStrawberry OP9 الخلايا تسمح لتقييم كامل لجميع ذرية ES المستمدة من الثقافة المشتركة.

تعديل ES / OP9 المشارك الثقافة ينص البروتوكول خصائص محسنة من النسل للدم

يعد التمايز المختبري للخلايا الجذعية الجنينية (ES cells) نحو مصير خلوي مكون للدم مفيداً عند دراسة المجموعات الخلوية التي يصعب الوصول إليها داخل الجسم...

الهدف العام من التجربة التالية هو تمايز الخلايا الجذعية الجنينية للفئران إلى سلالات مختلفة من الخلايا المكونة للدم البدائية والنهائية. ولتوصيف جميع النواتج المشتقة من الخلايا الجذعية الجنينية، يتم تحقيق تمايز الخلايا المكونة للدم في الفئران عن طريق وضع الخلايا الجذعية الجنينية على طبقة متلاحمة من خلايا OP nine السدوية المسمى فلوروسنتياً بـ M strawberry. ويمثل كل يوم من أيام التمايز أو الزراعة المشتركة المراحل المختلفة للتطور المكون للدم في وقت الحصاد المناسب.يمكن فصل نسل الخلايا الجذعية الجنينية (ES cell) المتمايزة عن الخط الخلوي السدوي M strawberry OP nine عن طريق فرز الخلايا. يُحاكي بروتوكول تمايز الخلايا الجذعية الجنينية هذا عملية تكوين الدم البدائية والنهائية كما تُلاحظ في الجسم الحي، ويمكن استخدامه لتوصيف عيوب تكوين الدم المرتبطة بخطوط الخلايا الجذعية الجنينية المعطلة جينياً (knockout) دون الحاجة إلى استخدام الأجنة. مرحباً بكم في مختبر الدكتورة جوديث غاسن في مركز جونسون الشامل للسرطان بجامعة كاليفورنيا لوس أنجلوس (UCLA).اسمي أليسيا بوز. الميزة الرئيسية للتقنية التي سأعرضها لكم اليوم مقارنة بطرق الزراعة المشتركة الحالية لـ ESO nine هي أن هذا الإجراء يسمح بتمرير جميع خلايا اليوم الخامس واليوم الثامن، بالإضافة إلى الفصل الكامل لجميع السلالات المشتقة من ES. ومن السدى Nine M، تُزرع خلايا strawberry OP nine في وسط زراعة خلايا OP nine، والذي يجب تغييره كل يومين.يجب استزراع خلايا OP nine فرعياً قبل ثلاثة أيام من الموعد المطلوب لاستخدامها في الزراعة المشتركة. ومن المهم ملاحظة أنه خلال فترة الصيانة، يجب ألا يتم الحفاظ على خلايا OP nine بكثافة تتجاوز 90% من درجة تلاقي الخلايا. أولاً، اغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS، ثم أضف 0.1% trypsin EDTA المسخن مسبقاً لمدة خمس دقائق حتى تنفصل الخلايا. أضف وسط استزراع خلايا OP nine وانقل الخلايا إلى أنبوب مخروطي سعة 50 milliliter.قم بترسيب الخلايا في الأنبوب عند 300 G لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة بعد عملية الطرد المركزي، وتخلص من السائل الطافي ثم أعد تعليق الخلايا في وسط زراعة خلايا M strawberry OP nine جديد. ازرع الخلايا بكثافة لا تقل عن 10⁴ خلية/سم² في اليوم الذي تبدأ فيه تجربة الزراعة المشتركة. يجب أن تكون خلايا OP nine التي تم استزراعها قبل ثلاثة أيام متلاحمة. كما يجب زراعة خلايا ES وفقاً للبروتوكول القياسي الخاص بسلالة الخلايا المستخدمة.اغسل خلايا ES مرتين باستخدام PBS، ثم قم بهضمها باستخدام 0.25% tryin EDTA واحضنها لمدة خمس دقائق عند 37 درجة مئوية. بعد ذلك، أضف وسط تمايز الزراعة المشتركة إلى خلايا ES وانقلها إلى أنابيب مخروطية سعة 15 milliliter. قم بترسيب خلايا ES عند 400 G لمدة تتراوح من خمس إلى سبع دقائق في درجة حرارة الغرفة.بعد إزالة السائل الطافي، قم بإعادة تعليق خلايا ES في وسط تمايز الزراعة المشتركة. استخدم إبرة ذات طرف غير مدبب بقياس 21 gauge للحصول على معلق من الخلايا المفردة. قم بعد الخلايا باستخدام صبغة tripan blue ومقياس كرات الدم (hemocytometer).الآن قم باستعادة قارورة M strawberry. وأخرج خلايا OP nine من الحاضنة. قم بإزالة الوسط من خلايا OP nine وأضف وسط تمايز الزراعة المشتركة إلى طبق القارورة.أضف 1×10³ من الخلايا الجذعية الجنينية (ES cells) لكل سنتيمتر مربع إلى كل دورق من خلايا M strawberry OP9. يتم تحضين الخلايا عند 37 درجة مئوية، و5% من ثاني أكسيد الكربون مع الرطوبة. يمثل هذا اليوم صفر، ويجب أن يبدو المستنبت المشترك بهذا الشكل. بعد ثلاثة أيام من بدء المستنبت المشترك بين خلايا ES وخلايا M strawberry OP9.يُلاحظ وجود تجمعات مسطحة كبيرة غالباً من السلالات المشتقة من الخلايا الجذعية الجنينية (ES) ذات حدود محددة، وقد تبدأ بعض الدوامات الخلوية في التشكل. قم بإزالة الوسط من المزرعة المشتركة بعناية واستبدله بوسط تمايز جديد بعد مرور خمسة أيام من بدء المزرعة المشتركة. يجب أن يؤدي التمايز السليم لخلايا ES على طبقة متصلة من خلايا M strawberry OP nine إلى تكوين أرومات دموية (heman eblasts)، والتي تظهر على شكل كتل خلوية متراكمة.إن الجانب الأكثر أهمية في هذا الإجراء هو التأكد من تحقيق تمايز سليم في اليوم الخامس من الزراعة المشتركة. في هذه المرحلة، يمكنك رؤية مستعمرات أرومات الخلايا البشرية ليس مجهرياً فحسب، بل وعيانياً أيضاً. اغسل الزراعة المشتركة بعناية مرتين باستخدام PBS، ثم قم بهضم الخلايا باستخدام 0.25%tripsin EDTA، واغسل الخلايا من الدورق باستخدام وسط تمايز ES وانقلها إلى أنبوب، ثم قم بترسيب الخلايا عند 400 G لمدة سبع دقائق في درجة حرارة الغرفة.بعد عملية الطرد المركزي، قم بإزالة السائل الطافي وأضف وسطاً غذائياً جديداً. ثم استخدم إبرة ذات طرف غير مدبب بمقياس 21 لإعادة تعليق الخلايا، ولضمان الحصول على معلق خلوي مفرد، قم بعد الخلايا باستخدام مقياس كرات الدم (hemocytometer)؛ حيث يجب أن تكون هناك زيادة بمقدار 100 إلى 150 ضعفاً في عدد خلايا ES مقارنة باليوم صفر. أعد زراعة خلايا الزراعة المشتركة على طبقة جديدة من خلايا M strawberry OP nine الملتصقة تماماً في اليوم الثامن أو التاسع، وفي اليوم 12، قم بعد الخلايا مرة أخرى. قم بإزالة الوسط الغذائي الذي يحتوي على الخلايا المكونة للدم واحتفظ به.اغسل الطبقة أحادية الخلية مرة واحدة بـ PBS. لإزالة الخلايا المكونة للدم العالقة والاحتفاظ بها، أضف 0.25%tripsin EDTA إلى القارورة، وبعد التصاق الخلايا بالتربسين، اغسل الخلايا من القارورة باستخدام وسط تمايز ES وأضفها إلى الخلايا المكونة للدم الموجودة في العالق. قم بطرد الخلايا مركزياً عند 400 G لمدة سبع دقائق في درجة حرارة الغرفة. وأخيراً، أعد تعليق الخلايا باستخدام إبرة ذات نهاية غير مدببة بقياس 21 gauge وقم بعدّ الخلايا. الآن أصبحت الخلايا جاهزة لإعادة الزرع أو الاستخدام في المقاييس اللاحقة.يمكن استخدام نظام الزراعة المشتركة للخلايا الجذعية الجنينية (ES) وخلايا M strawberry OP nine لنمذجة التطور المكون للدم الموضح. إليكم نظرة عامة على الجدول الزمني للزراعة المشتركة، حيث يتم تحديد الأيام التي يجب فيها نقل سلالات الخلايا الجذعية الجنينية المتمايزة إلى خلايا M strawberry OP nine جديدة. سيؤدي التمايز الصحيح للخلايا الجذعية الجنينية على طبقة متصلة من خلايا M strawberry OP nine إلى إنتاج flick one positive.تظهر الأرومات الوعائية في اليوم الخامس من الزراعة المشتركة؛ حيث تُعد الخلايا العظمية البشرية سلائف ميزودرمية مشتركة للسلالات البطانية والمكونة للدم، ويجب أن تظهر على شكل دوامات خلوية متراكمة كما هو موضح في هذه الصورة. ومع استمرار الزراعة المشتركة، تظهر تجمعات مكونة من خليتين إلى أربع خلايا في اليوم السادس أو السابع وتنمو لتصبح تجمعات خلوية أكبر. وبحلول اليوم الثامن أو التاسع، تكون السلائف المكونة للدم قد ظهرت بالفعل في اليوم السادس، بينما تظهر السلالات المكونة للدم والمتمايزة نهائياً بحلول اليوم 14.على النقيض من ذلك، فإن الزراعة المشتركة التي تعاني من تمايز غير صحيح للخلايا الجذعية الجنينية (ESL) ستؤدي إلى سلالات مشتقة من الخلايا الجذعية الجنينية لا تظهر في نمط عالمي (world pattern) في اليوم الخامس. ويشير غياب الخلايا في النمط العالمي إلى تكوين غير صحيح للأرومات الغازية (GIO blasts). إن الزراعة المشتركة التي تفتقر إلى تكوين سليم للأرومات الجنينية (eblasts) ستؤدي في النهاية إلى تعثر تمايز السلالة المكونة للدم، ويجب التخلص منها وفقاً لبروتوكول الزراعة المشتركة المعدل لـ ES OP nine.تكون السلالات المشتقة من ES سالبة لـ m strawberry ويمكن فرزها بالتدفق الخلوي من السلالات الموجبة لـ M strawberry. يتم التقاط تسع خلايا في أي يوم من أيام الزراعة المشتركة لتقييمها. النتائج الموضحة هنا هي من تجربة تمثيلية.ركزت تسعة بروتوكولات سابقة للزراعة المشتركة لـ ES OP حصراً على تمرير وتقييم الخلايا العائمة غير الملتصقة. أما في هذا البروتوكول المعدل، فيتم تمرير وتقييم جميع الخلايا المشتقة من ES، سواء كانت الخلايا الملتصقة أو غير الملتصقة. ويؤدي ذلك إلى زيادة إنتاجية الخلايا المكونة للدم، ويسمح بتحديد مجموعات نادرة من الخلايا، كما يتيح التوصيف الكامل لجميع سلالات ES، سواء المكونة للدم أو غير المكونة للدم.

modified-es-op9-co-culture-protocol-provides-enhanced

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

تفاصيل هذا البروتوكول اشتقاق زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم من الخلايا الجذعية الجنينية (ESC) ، والحقن في وقت لاحق في الفئران المتلقي المشع القاتلة. باختصار ، كانت متباينة ESC كهيئات مضغي الشكل ، والذي يصاب بعد ذلك مع HoxB4 فيروسات وشارك في تربيتها مع OP9 الخلايا اللحمية والسيتوكينات المكونة للدم.

اشتقاق خلايا الجذعية المكونة للدم من الفئران خلايا الجذعية الجنينية

تم وصف طريقة لتحليل التوزيع من الأسلاف نخاع العظام المكونة للدم في التدفق الخلوي، وكذلك لعزل بكفاءة عالي النقاء الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs). ويستند أساسا لإجراء العزل في تخصيب المغناطيسي للخلايا + C-كيت والخلية فرز لتنقية HSCs للدراسات الخلوية والجزيئية.

المظهري التحليل وعزل الخلايا الجذعية المكونة للدم الفئران والأسلاف النسب، الملتزم

يصف هذا الفيديو تقنية الزراعة المشتركة ثنائية الأبعاد طويلة المدى لخلايا سرطان الدم مع الخلايا اللحمية لنخاع العظم لدراسة تفاعلها مع البيئة المكروية لنخاع العظم. يستخدم نموذج الزراعة المشتركة ثنائي الأبعاد خلايا ابيضاض الدم الليمفاوية الحادة ونخاع العظم اللحمي أو بانيات العظم التي تؤثر على النمط الظاهري للخلايا السرطانية. ستدعم هذه الدراسة التحقيق في الآليات التي تكمن وراء بقاء نخاع العظم المدعوم لخلايا سرطان الدم أثناء التعرض للعلاج الكيميائي.

الزراعة المشتركة ثنائية الأبعاد لخلايا سرطان الدم مع BMSCs: طريقة للحصول على مجموعات سكانية فرعية من خلايا سرطان الدم

يمكن تمييز الخلايا الجذعية الجنينية للفأر  إلى الخلايا التائية في المختبر باستخدام نظام الزراعة المشتركة OP9-DL1. يتطلب النجاح في هذا الإجراء اهتماما دقيقا بصيانة الكاشف / الخلية ، والخطوات الرئيسية الحساسة للتقنية. نناقش هنا هذه المعلمات الهامة ونقدم بروتوكولا مفصلا لتشجيع اعتماد هذه التكنولوجيا.

اشتقاق خلايا T في المختبر من الفأر الجنينية الخلايا الجذعية

تم وصف البروتوكولات الحالية للحفاظ على خلايا السلف الأذني متعدد القدرات (iMOP) الخالدة وتمايز الأذن.  يتم تسليط الضوء على ظروف الثقافة والعلامات الجزيئية التي تشير إلى التمايز إلى ظهارة حسية وخلايا عصبية عقدية حلزونية (SGN).

بدء التمايز في الخلايا متعددة القدرات مخلد أذني السلف

هنا، فإننا نقدم pluripotent البشرية بروتوكولات الثقافة الخلايا الجذعية (هبسك)، يستخدم للتفريق بين هبسكس إلى CD34+ فروعه المكونة للدم. يستخدم هذا الأسلوب الخاصة بمرحلة التلاعب الكنسي WNT الإشارات لتحديد الخلايا حصرا لأي برنامج نهائي أو البدائية المكونة للدم.

وجه التفريق بين فروعه المكونة للدم البدائي والنهائي من الخلايا الجذعية Pluripotent البشرية

ويصف هذا البروتوكول استخدام مثقف الشريان الاورطي-الغدد التناسلية-ميسونيفروس لتعبير تحاليل، الوحدات المكونة للمستعمرة في الثقافة والطحال، وإعادة بناء طويلة الأجل لتحديد تأثير العوامل التنظيمية ومسارات الإشارات على الجذعية المكونة للدم خلية التنمية. وقد ثبت كنظام فعال لدراسة بيولوجيا الخلايا الجذعية المكونة للدم ووظيفة.

تطبيق نظام الثقافة Explant الشريان الاورطي-الغدد التناسلية-ميسونيفروس في هيماتوبويسيس الإنمائية

ونحن لشرح كيفية تحديد وعزل 6 مجموعات فرعية من فروعه النقوي من مورين نخاع العظام باستخدام مزيج من المغناطيسية والأسفار الفرز (أجهزة ماكينتوش ونظام مراقبة الأصول الميدانية). يمكن استخدام هذا البروتوكول في المختبر فحوصات الثقافة (الثقافات methylcellulose أو السائل) و في فيفو المتبنيين نقل التجارب وتحاليل الحمض النووي الريبي/البروتين.

تحديد وعزل أوليجوبوتينت والنسب التي ارتكبت النقوي موروث من نخاع العظام الماوس

الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSPCs) الانتقال من حاله هادئه إلى حاله التمايز بسبب اللدونة الايضيه اثناء تشكيل الدم. هنا ، نقدم طريقه الأمثل لقياس التنفس الميتوكوندريا وتحلل من HSPCs.

تحليل استقلاب الخلايا الجذعية للدم

يحدد هذا البروتوكول إجراء لتحفيز تمايز الخلايا الجذعية والخلايا السلفية البشرية المسببة للدم، المشتقة من نخاع العظم والخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي. يستخدم الاختبار وسط زراعة شبه صلب يدعم الالتزام بخطوط الحمراء والنخاع، ويدمج مقاييس موحدة لتصنيف المستعمرات القابلة للتكرار لتوصيف الأدوية قبل السريري.

اختبار وحدة تكوين المستعمرة متكيف مع نخاع العظم والخلايا أحادية النواة المحيطية المستمد من المريض

اكتشف طريقة تمييز خلايا جذعية جنينية فأرية إلى سلالات دموية باستخدام خلايا OP9 الداعمة. يتيح هذا البروتوكول تقييم كامل للنسل المشتق من ES لدراسة تطور الدم وعيوبه.

تعديل ES / OP9 المشارك الثقافة ينص البروتوكول خصائص محسنة من النسل للدم

استكشف المزيد من الفيديوهات