تحضير كلية الفئران منزوعة الخلايا: إجراء لتوليد سقالة الأوعية الدموية الكاملة من كلية الفئران المحصودة

تتكون السقالات منزوعة الخلايا من جميع الأعضاء من مصفوفة ثلاثية الأبعاد خارج الخلية مع شبكة وعائية سليمة. تحتفظ هذه السقالات بتكوين أنسجة معين وسلامة وظيفية وتلعب دورا أساسيا في الهندسة الحيوية للأجهزة.

لتحضير كلية الفئران منزوعة الخلايا ، أولا ، احصل على كلية فئران تم حصادها حديثا جنبا إلى جنب مع الأوعية الدموية الشريانية والوريدية الرئيسية - الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي. اربط الحالب والتشعبات الشريانية الصغرى والوريدية لمنع تسرب السائل أثناء عملية التروية اللاحقة.

ضع الكلى في مخزن مؤقت مناسب لضمان ترطيب الأعضاء. أدخل القسطرة ذات الحجم المناسب في الأوعية الدموية الرئيسية وقم بتثبيتها. قم بتوصيل القسطرة بمضخة تمعجية. قم بتحجيم الكلية بمحلول احتواء يحتوي على مضادات التخثر بمعدل تدفق وضغط مناسبين للمدة المطلوبة.

تساعد هذه الخطوة على إزالة الدم بكفاءة من العضو من خلال التدفق الوريدي. قم بتغيير الريشات إلى خافض للتوتر السطحي غير أيوني لاختراق الأغشية الخلوية. بعد ذلك ، قم بتفريخ العضو بخافض للتوتر السطحي أنيوني لإذابة الأغشية الخلوية والنووية بشكل فعال ، مما يؤدي إلى تحلل الخلايا وإطلاق المحتويات داخل الخلايا.

تتدفق المكونات الخلوية المحررة والحطام من الكلى ، مما يجعلها شفافة تدريجيا. حقن الكلية منزوعة الخلايا بمخزن مؤقت مناسب يحتوي على مضادات حيوية ومضادات التخثر لإزالة المواد الخافضة للتوتر السطحي المتبقية وأي بقايا متبقية من العضو. تمنع المضادات الحيوية احتمالية نمو البكتيريا داخل العضو منزوع الخلايا.

حصاد الكلية اليسرى مع الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي. ربط الحالب والشريان الأورطي الصدري والوريد الأجوف العلوي وفروع الشريان الأورطي البطني. حافظ على ترطيب العضو في DPBS في طبق بتري بطول 10 سم. قم بتقشير الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي باستخدام قسطرة قياس 23.

لإزالة الدم المتبقي ، قم بتوصيل القنية بمضخة تمعجية واغسل العضو ب 500 مل من DPBS و 16 وحدة لكل مليلتر من الهيبارين لمدة 90 دقيقة عند 5 دورات في الدقيقة و 37 درجة مئوية. لإزالة الخلايا من الكلى ، قم بنقسها ب 1٪ Triton X-100 لمدة 3 ساعات ثم بمحلول SDS بنسبة 0.75٪ لمدة 6 ساعات عند ضغط ثابت يبلغ 40 مل من الزئبق.

لإزالة SDS المتبقية ، قم بنقف العينة ب 1٪ بنسلين في الماء المقطر لمدة 18 ساعة ثم باستخدام DPBS معقم و 16 وحدة لكل مليلتر من الهيبارين لمدة 90 دقيقة.