موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:47 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بجذع مخلد وخلية سلف مكونة للدم ، iHSPC ، مزرعة في وسائط تحتوي على هرمون ستيرويد معين وسيتوكين مكونة للدم ، مما ينظم تكاثر الخلايا في حالة غير متمايزة. أضف بوليمر كاتيوني مناسب وناقلات الفيروسات العدسية.
تحمل الفيروسات المؤتلفة تسلسلات ترميز للحمض النووي الريبي القصير ، shRNAs ، الموجهة نحو جين مضيف معين وجين علامة مقاومة المضادات الحيوية.
أجهزة الطرد المركزي لخلايا الرواسب والفيروسات. أثناء الحضانة ، تعمل البوليمرات الموجبة على تحييد شحنات الغشاء الخلوي ، مما يعزز الارتباط الفيروسي. بعد اندماج الغشاء ، تطلق المادة الوراثية الفيروسية والإنزيمات في السيتوبلازم الخلوي. يتم نسخ الجينوم الفيروسي بشكل عكسي ، وينتقل إلى النواة ، ويتكامل في جينوم المضيف.
تحت تأثير محفز معين في البناء ، يتم نسخ بناء جين shRNA الذي يشتمل على تسلسل مطابقة mRNA مستهدف ، ومقطع حلقة ، وتسلسل آخر مكمل للأول ، لتشكيل shRNA مع جزء حلقة من النيوكليوتيدات غير المزاوجة. بعد النسخ ، يتم تصدير shRNA إلى السيتوبلازم.
يشق نوكلاز الريبونوكلياز المحدد الجزء الحلقي ، مكونا الحمض النووي الريبي مزدوج الشريطة ، siRNA. يتم دمج siRNA في مجمع الإسكات الناجم عن الحمض النووي الريبي ، وفصل خيوط RISC و siRNA. يتعرف المركب المنشط مع الخيط المحتفظ به المكمل ل mRNA المستهدف ويرتبط به بطريقة خاصة بالتسلسل ، مما ينظم التعبير سلبا ويتو
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية