تحرير الجينوم القائم على نوكلياز إصبع الزنك: تقنية لتعديل الجينوم في الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات عن طريق آلية إصلاح التماثل المعتمد على التماثل المزدوج

يحتوي نوكلياز إصبع الزنك أو ZFN على مجال ماكرو مرتبط بالحمض النووي مستقر بأيون الزنك متصل بمجال نوكلياز داخلي عبر رابط. يساعد هذا الهيكل في الحفاظ على الخصوصية أثناء قطع الحمض النووي.

لاستخدام ZFNs لتحرير الجينوم ، خذ مزرعة الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات. استكمله ببلازميد يشفر ZFN. أضف بلازميد إصلاح يحتوي على الجين المستهدف وجين مقاومة المضادات الحيوية المحصور بين أذرع التماثل أو HAs. قم بالكهرباء بخليط الخلية والحمض النووي حيث يسهل التيار الكهربائي دخول البلازميدات داخل الخلية.

بمجرد دخولها ، ترتبط زخارف إصبع الزنك الخاصة ب ZFN المترجمة بثلاثة توائم من أزواج القواعد التكميلية في جينوم المضيف ، مما يضع نوكلياز تقييد Fok-1 بشكل صحيح في الموقع المستهدف. ترتبط ZFNs بخيوط متقابلة في أزواج مما يسمح لتجانس Fok-1 بتشكيل مركز تحفيزي نشط يولد فيه Fok-1 فواصل مزدوجة الشريطة من الحمض النووي أو DSBs ، مما ينتج عنه أربعة نيوكليوتيدات.

يوجه وجود HAs في بلازميد الإصلاح الإصلاح المعتمد على التماثل حيث ينقلب الطرف المتدلي ويستخدم تسلسل HA المتماثل كقالب. يستمر تخليق الحمض النووي عن طريق إضافة النيوكليوتيدات المكملة للجين المستهدف.

يتم ربط الفجوات الناتجة ، مما يسهل إدخال الجينات. بالإضافة إلى ذلك ، يتم التعبير عن جين مقاومة المضادات الحيوية غير المحفز من محفز مضيف في اتجاه المنبع من موقع ال