phiC31-تكامل الجينات المعدلة وراثيا الموجه بوساطة الموقع: تقنية حقن مجهري لتكامل الجينات المعدلة وراثيا في ناقل الأنوفيليس

phiC31 integrase هو إنزيم إعادة تركيب مشتق من العاثيات يحفز إعادة التركيب الخاص بالموقع للجين المعدل ، وهو جين غريب ، في جينوم المضيف. لتكامل الجينات المعدلة وراثيا في مضيف Anopheles ، ابدأ بجنين Anopheles في مخزن مؤقت مناسب.

تم تصميم جينوم Anopheles مسبقا مع موقع مرفق لتكامل الجينات وعلامة فلورية سماوية للاختيار البصري. بعد ذلك ، أضف حجما صغيرا من البلازميد المتبرع الذي يحمل البضائع الجينات المعدلة وراثيا المطلوب ، وموقع التعلق ، وعلامة فلورية حمراء ، ومكونات العمود الفقري البلازميد إلى قارورة. بعد ذلك ، أضف الحجم الأمثل من البلازميد المساعد الذي يحمل إنتگراز مشفر الجينات. الآن ، قم بتحميل خليط البلازميد في حقنة دقيقة.

قم

بحقن البلازميدات برفق في القطب الخلفي للجنين ، وهو موقع منشأ الخلايا الجرثومية ، مما يؤدي إلى حركة طفيفة للسيتوبلازم. بمجرد دخول الجنين ، يبدأ البلازميد المساعد في تصنيع إنزيمات التكامل.

يتوسط إنزيم التكاملات إعادة التركيب الخاص بالموقع بين البلازميد المتبرع والجينوم المضيف. وبالتالي ، فإن الجين المعدل وعلامة الفلورسنت الحمراء من البلازميد المتبرع يندمج داخل مواقع التعلق المؤتلف في جينوم الأنوفيل. بعد ذلك ، احتضان الجنين المحقون في ظل ظروف فسيولوجية للفقس ، مع دوامة متقطعة.

في غضون أيام ، يفقس الجنين في يرق. تحت المجهر الفلوري ، تعبر يرقة الأنوفيليس ذات الجينات ا