التعبير الجيني القائم على النظام القابل للتنظيم المحفز في الجسم الحي: نظام تعبير جيني ناتج عن التتراسيكلين لتنشيط نسخ الجينات المستهدفة في نموذج الفأر

نظام التتراسيكلين أو التيه أون هو نظام تعبير جيني شرطي ينشط التعبير عن الجين ذي الأهمية في وجود التتراسيكلين أو الدوكسيسيكلين التناظري.

ابدأ بفأر معدل وراثيا مع جينوم معدل يحتوي على جين يشفر بروتين منشط النسخ العكسي الذي يتم التحكم فيه بواسطة التتراسيكلين ، أو rtTA ، مدفوعا بمحفز خاص بالكبد في خلايا الكبد أو خلايا الكبد. بالإضافة إلى ذلك ، يحتوي الفأر على جين مهم تحت سيطرة مشغل التتراسيكلين أو تسلسلات tetO الموجودة في المنبع ويتم دمجها بشكل انتقائي مع الحد الأدنى من المحفز. يطلق على tetO والمحفز اسم العنصر المستجيب للتتراسيكلين ، أو TRE.

يشكل rtTA المعبر عنه - وهو بروتين اندماجي يشتمل على مثبط tet و tetR ومجال تحويل بروتين فيروسي VP16 - ثنائيات غير نشطة وغير نشطة ولا يمكن أن ترتبط بتسلسل tetO من TRE ، مما يمنع تنشيط التعبير الجيني المستهدف.

تحضير محلول يحتوي على الدوكسيسيكلين والسكروز. إضافة السكروز تزيد من الاستساغة. بعد التصفية ، قم بتوفير محلول الدوكسيسيكلين والسكروز كمياه شرب للفأر. يتراكم الدوكسيسيكلين المعطى في الكبد.

في خلايا الكبد ، يرتبط الدوكسيسيكلين ب rtTA ، مما يتسبب في تغيير توافقي وزيادة التقارب مع موقع ربط الحمض النووي tetO. يرتبط مجال ربط الحمض النووي tetR ل rtTA المرتبط بالدوكسيسيكلين بتسلسل tetO لعنصر TRE. يقوم مجال VP16 بتجنيد بوليميراز الحمض النووي الريبي ، مما