موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:34 دقيقة • July 8th, 2025
من أجل التعدين العكسي للحمض النووي الريبي الصغير المتداخل ، أو siRNA ، وهي فئة من الحمض النووي الريبي مزدوج الشريطة ، إلى الخلايا الشحمية أو الخلايا الدهنية غير الملتصقة ، قم بإعداد تعليق من siRNAs التي تستهدف جينا معينا لترميز البروتين في الخلايا الشحمية. أضف كاشف تعداء دهني كاتيوني مناسب. احتضان الخليط لتشكيل مجمعات تعداء من خلال التفاعلات الكهروستاتيكية.
انقل الخليط إلى آبار مطلية بالكولاجين في صفيحة متعددة الآبار. تشل مجمعات التعدي على طلاء اللوحة عن طريق تفاعلات غير محددة. ماصة معلق من الخلايا الشحمية في آبار تحتوي على مجمعات تعداء ثابتة. تلتصق الخلايا الشحمية بشكل فضفاض بطلاء اللوحة ، مما يزيد من الاتصال الجسدي بين الخلايا والمجمعات.
يندمج مركب التعدي مع غشاء الخلية ويسلم siRNA إلى السيتوبلازم. يتم التعرف على siRNA ، الذي يتألف من خيط مضاد للمعنى مع تسلسل تكميلي لاستهداف mRNA وخيط إحساس ، بواسطة مركب إسكات الحمض النووي الريبي متعدد البروتينات ، أو RISC. يرتبط siRNA ب RISC ، وتنفصل الخيوط ، مع بقاء الخيط المضاد للمعنى مرتبطا بالمجمع.
يتعرف مركب siRNA-RISC المنشط على المواقع التكميلية على mRNA المستهدف ويرتبط بها. هذا يؤدي إلى انقسام خاص بالتسلسل من mRNA بواسطة بروتين أرجونوت لمركب RISC. يتم تدهور mRNA المشقوق بواسطة الآلية الخلوية ، وبالتالي إسكات التعبير الجيني المستهدف.
ماصة
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية