موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 5:40 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بأجنة أسماك الزرد القابلة للحياة ذات المرحلة الواحدة الموضوعة في آبار قالب الحقن المجهري.
قم بتحميل إبرة الحقن المجهري بمحلول يحتوي على الرنا المرسال المشفر للينقولات Tol2 وبلازميدات مانحة للينقولات. تتكون البلازميدات من محفز لأسماك الزرد في كل مكان وجين مشفر للبروتين الفلوري محاط بأذرع الينقولات Tol2.
قمبحقن محلول الحقن المجهري بعناية في سيتوبلازم جنين الزرد. داخل الخلية ، تترجم Tol2transposase mRNAs إلى بروتينات الترانسبوزاز Tol2 ويتم نقلها بنشاط إلى النواة.
تشتمل مواقع Tol2 على بلازميد المتبرع على تكرارات طرفية مقلوبة محددة ، أو ITRs ، تحيط بجين المراسل. ويحيط بلوائح الاتصالات الدولية تكرارات قصيرة ومباشرة. تتعرف بروتينات الترانسبوزاز على مواقع ITR وترتبط بها ، وتشكل دبوسا حادا على الحمض النووي المحيط بها. تعمل الترانسبوزاز على شق بنية الينقولات من الحمض النووي المحيط بها ، وتطلقه من البلازميد وتترك وراءها تكرارات قصيرة ومباشرة.
تخلق الينقولات انفصالا مزدوجا متداخلا في جينوم الخلية الجسدية وتدخل بنية الينقولات في موقع الجينوم. يؤدي ملء الفجوة في الأطراف المتداخلة بواسطة بوليميراز الحمض النووي متبوعا بربط النكات إلى تكرارات قصيرة ومباشرة.
يتسبب الربط في تكامل بناء الينقولات المستقرة في جينوم الخلية الجسدية ، ويسهل المحفز التعبير عن البروتين الفلوري. احتضان الأجنة المحقونة.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية