موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:29 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بتعليق الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان ، hiPSCs ، في مخزن مؤقت مناسب للتثقيب الكهربائي. أضف محلولا يتكون من بلازميدات ترميز PiggyBac والبلازميدات المانحة. التثقيب الكهربائي الخليط.
تتخلل النبضات الكهربائية أغشية الخلايا بشكل عابر ، مما يسهل امتصاص الخلايا للبلازميدات. تشتمل البلازميدات المانحة على تكرارات طرفية مقلوبة خاصة بالينقولات ، ITRs ، وهي مكملات مقلوبة لبعضها البعض ، محاطة بتكرارات TTAA بين قوسين البروتين المستهدف وجينات مقاومة المضادات الحيوية.
تخلق بروتينات الترانسبوزاز PiggyBac المعبر عنها شقوقا في نهايات 3 من ITRs ، داخلية لتكرار TTAA. تهاجم مجموعات الهيدروكسيل المكشوفة 3'-الهيدروكسيل نيوكليوتيدات الخيط التكميلي داخل الحمض النووي المرافق ، وتشكل دبابيس شعر TTAA على نهايات الينقولات ، وبالتالي إطلاق بنية الينقولات من البلازميد.
تعمل الينقولات على حل دبابيس الشعر لتشكيل نتوءات TTAA في نهايات 5 'من بنية الينقولات. تخلق الينقولات أيضا فواصل مزدوجة الخيط في تسلسل TTAA في جينوم المضيف. تهاجم نهايات الينقولات 3'-hydroxyl التي تم إطلاقها تسلسل TTAA في النهايات المتداخلة ، مما يؤدي إلى الارتباط التساهمي لبناء الينقولات بالجينوم المضيف ، مما يترك فجوات أحادية الخيط تحيط ببناء الينقولات. يتم ربط هذه الفجوات في الحمض النووي المضيف ، مما يؤدي إلى تكامل مستقر
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية