موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:34 دقيقة • July 8th, 2025
يكتشف تفاعل البوليميراز المتسلسل بالقطرات الرقمية طفرات إندل — إدخال أو حذف عشوائي للنيوكليوتيدات في الحمض النووي. يتم تحقيق ذلك عن طريق تقسيم العينة إلى قطرات صغيرة وتضخيم الحمض النووي بشكل مستقل في كل قطرة.
لإجراء ddPCR ، خذ عينة من الحمض النووي تحتوي على أشكال مختلفة من النوع البري والمتحورة للجين المستهدف. قم بتحميل مزيج العينة والزيت في مقصورات مميزة لغرفة مولد القطرات التي تحتوي على قناة الموائع الدقيقة.
تتدفق العينة والزيت بسرعة عبر القنوات الضيقة ، وتستحلب عند التقاطع ، ويتم تقسيمها إلى عدة قطرات ، تحتوي كل منها على عدد قليل من جزيئات الحمض النووي.
الآن ، خذ لوحة PCR مع المخزن المؤقت الذي يحتوي على بادئات أمامية وخلفية ، و dNTPs ، وبوليميراز DNA القابل للحرارة ، ومسبارين موسومين بفلوروفورات مختلفة وجزيئات مروية. كل مسبار خاص بنوع معين من الأليل - من النوع البري أو المتحور.
انقل القطرات إلى لوحة PCR. ضع اللوحة في جهاز تدوير حراري ، وقم بتشغيل التفاعل. أثناء التمسخ ، تنفصل خيوط الحمض النووي. في درجة حرارة التلدين ، تلدين البادئات والمجسات إلى الحمض النووي للقالب.
يرتبط المسبار مع الفلوروفورات الخضراء والبرتقالية بتسلسل الحمض النووي من النوع البري والمتحور على التوالي. في وقت لاحق ، يمتد بوليميراز الحمض النووي إلى البادئات ، ويشق جزيئات الفلوروفور والتبريد من المسبار ، مما يول
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية