موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 8:45 دقيقة • July 8th, 2025
يسمح تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي المزدوج - ddPCR - بالكشف الكمي المتزامن عن علامتين جينيتين متميزتين.
للبدء ، خذ عينة تحتوي على تسلسلين مختلفين للهدف. أضف خليطا يحتوي على إنزيم بوليميراز DNA المقاوم للحرارة ، و dNTPs ، والبادئات الخاصة بالهدف. بعد ذلك ، أضف مجسين مختلفين من قليل النوكليوتيدات الخاص بالهدف ، المسمى بمراسلي الفلورسنت وجزيء التبريد لاكتشاف الأهداف المضخمة.
يتماستحلاب المحلول بالزيت لتقسيم التسلسلات المستهدفة إلى العديد من القطرات النانوية. تعمل كل قطرة تحتوي على الهدف كوعاء تفاعل فردي.
ابدأ عملية التدوير الحراري لتفاعل التضخيم داخل القطرات النانوية الفردية.
عند درجة حرارة التمسخ العالية ، تنفصل الأهداف ذات الشريطة المزدوجة إلى خيوط مفردة.
اخفض درجة الحرارة للوصول إلى درجة حرارة التلدين المناسبة ، مما يسمح للبادئات ومجسات قليل النوكليوتيدات بالارتباط بالقالب.
قرب المروي يمنع تألق المراسل. عند درجة حرارة التمدد ، يمتد بوليميراز الحمض النووي البادئات ويشقق مسبار قليل النوكليوتيدات. المراسل غير المرتبط ينبعث منه تألق.
مرر القطرات عبر قارئ القطرات - نظام الكشف عن الفلورة. يشير اكتشاف التألق الفردي أو المزدوج إلى قطرات موجبة تحتوي على أهداف ، بينما يشير عدم وجود إشارة إلى قطرات سلبية.
تحددنسبة القطرات الموجبة إلى العدد الإجمالي للأقسام التركيز الأولي للتسلسلات المست
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية