موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:08 دقيقة • July 8th, 2025
PCR للنسخ العكسي الكمي في الوقت الفعلي مفيدا لتحديد الالتهابات الفيروسية.
ابدأ بعينة تحتوي على الحمض النووي الريبي الفيروسي المستهدف. أضف بادئات خاصة بالهدف - تساعد في كل من تخليق الحمض النووي وتضخيمه - جنبا إلى جنب مع إنزيم النسخ العكسي و dNTPs.
أضف بوليميراز الحمض النووي المقاوم للحرارة - وهو إنزيم لتضخيم الحمض النووي عبر دورات تفاعل البوليميراز المتسلسل - و SYBR green - وهي صبغة تداخل في الحمض النووي مزدوج الشريطة ، dsDNA. ضع التفاعل في دورة حرارية. اضبط درجة حرارة مناسبة لربط البادئات بالحمض النووي الريبي المستهدف.
يضيف النسخ العكسي dNTPs إلى التمهيدي بينما يشق الحمض النووي الريبي للقالب في نفس الوقت ، ويصنع (cDNA).
قم بزيادة درجة الحرارة ، وتعطيل النسخ العكسي. اخفض درجة الحرارة ، مما يسمح للبادئات بالتلدين ب (كدنا) لتضخيمها لاحقا. قم بزيادة درجة الحرارة للوصول إلى خطوة التمديد ، حيث يمتد بوليميراز الحمض النووي إلى البادئات ، وتجميع dsDNA.
تؤديالدورات المتتالية إلى تضخيم dsDNA الأسي. يرتبط SYBR الأخضر بالحمض النووي بأعداد متزايدة ، مما يتسبب في زيادة نسبية في انبعاث التألق. ارسم إشارة التألق المكتشفة عبر الدورات.
يشير منحنى التضخيم الإيجابي إلى وجود الحمض النووي الريبي الفيروسي في العينة.
قم بزيادة درجة الحرارة بشكل تدريجي للوصول إلى درجة حرارة الانصهار ، وتحويل DSDNA إلى
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية