تفاعل البوليميراز المتسلسل الحجب من النوع البري للكشف عن الطفرات الجسدية منخفضة التردد

يكتشف تفاعل البوليميراز المتسلسل من النوع البري ، أو WTB-PCR الطفرات النقطية عن طريق تضخيم الأليلات الطافرة منخفضة الوفرة بشكل انتقائي مع تثبيط تضخيم الأليلات البرية عالية الوفرة في عينات الحمض النووي.

يستخدم WTB-PCR الأحماض النووية المقفلة ، أو قليل النوكليوتيدات أحادي الشريطة والمعدل المحتوي على LNA مكمل لخيط الحمض النووي من النوع البري للعينة الذي يرتبط على وجه التحديد بالخيط التكميلي. يمنع ارتباط LNA نشاط بوليميراز الحمض النووي ويمنع استطالة الحمض النووي للقالب البري.

لإجراء WTB-PCR ، خذ مزيجا رئيسيا يحتوي على dNTPs و LNAs والبادئات الأمامية والخلفية الخاصة بالهدف في الماء المقطر الخالي من النوكلياز.

أضف محلولا يحتوي على بوليميراز الحمض النووي القابل للحرارة إلى الأنبوب ، وقم بإدخال المزيج في بئر لوحة PCR. أضف عينة الحمض النووي الجينومي التي تحتوي على الحمض النووي البري والمتحور في البئر ، وابدأ تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).

أثناء تفاعل البوليميراز المتسلسل ، يفصل التمسخ بوساطة درجة حرارة عالية الحمض النووي مزدوج الشريطة. تعمل الخيوط المنفصلة كقوالب للبادئات للتلدين ، بينما يرتبط LNA بخيط الحمض النووي التكميلي من النوع البري ويشكل هجين الحمض النووي من النوع المانع البرية. عند درجة حرارة أعلى ، يضيف بوليميراز الحمض النووي dNTPs ويوسع قوالب الحمض النووي التمهيدي.

درجة حرارة ا