Nested-PCR للكشف عن تسلسل جيني فيروسي معين
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:20 دقيقة • July 8th, 2025
لتفاعل البوليميراز المتسلسل المتداخل ، تفاعل البوليميراز المتسلسل المتداخل ، تضخيم تسلسل جيني معين بشكل انتقائي.
للكشف عن تسلسل فيروسي مستهدف ، ابدأ بمزيج رئيسي يحتوي على بادئات خارجية مكملة لمنطقة DNA أكبر تحتوي على التسلسل الفيروسي المستهدف ، و dNTPs ، وبوليميراز الحمض النووي القابل للحرارة في مخزن مؤقت مناسب.
أضف الحمض النووي الفيروسي المزدوج الذي تقطعت به السبل ، المستخرج من الخلايا المصابة بالفيروسات ، إلى هذا المزيج. نقل الأنبوب إلى الدراجة الحرارية ؛ قم بتشغيل دورة PCR الأولى.
أثناء التمسخ ، ينتج الحمض النووي المزدوج الشريطة قالبين أحادي الشريطة. عند درجة حرارة التلدين المناسبة ، ترتبط البادئات الخارجية بالتسلسلات المستهدفة المقابلة. في وقت لاحق ، يوسع بوليميراز الحمض النووي الاشعال باستخدام dNTPs ، مما ينتج عنه مكبرات كبيرة تحتوي على تسلسل محدد داخل الحمض النووي المضخم.
انقل هذه الأمبليكونات إلى أنبوب جديد. استكمل بمزيج رئيسي جديد يحتوي على بادئات داخلية أو متداخلة تستهدف تسلسلا أصغر وأكثر تحديدا داخل الحمض النووي المضخم الأكبر. قم بتشغيل PCR الثاني.
خلال تفاعل البوليميراز المتسلسل الثاني ، يفسد خيط الحمض النووي. بعد التمسخ ، تربط البادئات المتداخلة المواقع المستهدفة على القالب أحادي الشريطة ، متبوعا بامتداد التمهيدي بوساطة البوليميراز.
كرر دورة تفاعل البوليميراز المتس
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية