موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:09 دقيقة • July 8th, 2025
يكتشف تفاعل البوليميراز المتسلسل الذائب عالي الدقة ، HRM-PCR ، اختلافات تسلسل الحمض النووي المزدوج الشريطة ، وتسلسل dsDNA بدقة عالية.
ابدأ بمزيج رئيسي يحتوي على بوليميراز Taq غير النشط وثلاثي فوسفات الديوكسي ريبونوكليوتيد - dNTPs - وصبغة مراسل الفلورسنت. أضف الاشعال الأمامية والخلفية. ماصة الخليط في آبار لوحة PCR.
أضف قالب dsDNA. أغلق اللوحة ، مما يمنع تبخر الخليط. ابدأ تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).
تعمل درجة حرارة تغيير الطبيعة العالية على تغيير طبيعة dsDNA إلى الحمض النووي أحادي الشريطة ، ssDNA ، وتنشط البوليميراز. ثم يتم تبريد التفاعل إلى درجة حرارة التلدين ، مما يسهل الارتباط التمهيدي الأمامي والعكسي ب ssDNAs عبر الاقتران الأساسي التكميلي الخاص بالموقع.
يتم تجنيد البوليميراز المنشط ، مما يوسع الازدواج على الوجهين للحمض النووي التمهيدي عن طريق إضافة dNTP.
صبغة مراسل الفلورسنت - صبغة خاصة ب dsDNA موجودة بتركيزات مشبعة - تتداخل داخل الطباعة على الوجهين بأكملها ، وتتألق بشكل ساطع. يخضع الطباعة المزدوجة لدورات PCR متعددة ، مما ينتج عنه العديد من الأجزاء المحتوية على متغيرات.
بعد تفاعل البوليميراز المتسلسل ، قم بإجراء تحليل منحنى الذوبان عن طريق إعادة رفع درجة حرارة التفاعل بشكل مطرد بمرور الوقت.
اعتمادا على تسلسل النيوكليوتيدات ، قد يغير الموقع المحتوي على المتغير طبيعته أولا ،
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية