موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:28 دقيقة • July 8th, 2025
مثيلة بقايا سيتوزين الحمض النووي هي سمة مميزة للكريات البيض أو خلايا الدم البيضاء.
يسمح تفاعل البوليميراز المتسلسل متعدد القطرات ، أو mdPCR ، بالتحديد المتزامن لمناطق الحمض النووي الميثيلية المتعددة داخل الكريات البيض.
قم بإعداد مزيج يحتوي على المخزن المؤقت للتفاعل وبوليميراز الحمض النووي والماء الخالي من النوكلياز. أضف بادئات أمامية وخلفية ومساحات التحلل المائي الفلورية الخاصة بكل منطقة مستهدفة. تتكون المجسات من مراسلين فلوروفوريين بألوان مختلفة مرتبطين بأجهزة التبريد لمنع انبعاث التألق.
أضف الحمض النووي المحول بثنائي الكبريتيت ، حيث يتم إزالة السيتوزينات غير الميثيلة إلى يوراسيل بينما تظل السيتوزينات الميثيلية دون تغيير. خلط.
املأ حقنة زجاجية بمزيج زيت ناقل وخافض للتوتر السطحي وآخر بمزيج زيت ناقل و PCR ، وقم بتوصيلها بمولد قطرات الموائع الدقيقة. يستحلب مزيج PCR المائي بالزيت الناقل إلى قطرات بحجم أقل من النانولتر. يعمل الفاعل بالسطح على استقرار المستحلب ويمنع اندماج القطيرات.
اجمع القطرات وقم بإجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). داخل كل قطرة ، تؤدي درجة حرارة تغيير الطبيعة العالية إلى تغيير طبيعة الحمض النووي المزدوج الشريطة إلى حمض نووي أحادي الشريطة وينشط البوليميراز. يتم خفض درجة حرارة التفاعل ، مما يسمح بالتلدين الخاص بالموقع للبادئات والمجسات.
عندما يرتبط البوليميراز ويم
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية