تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي القائم على الأنبوب للقياس الكمي لمتغيرات النوكليوتيدات المفردة

يعد تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي - أو dPCR - مفيدا في تحديد متغيرات النوكليوتيدات المفردة - أو SNVs - وهي طفرة حيث يؤدي استبدال نيوكليوتيدات واحدة في موضع محدد في الجينوم إلى إنشاء نوعين مختلفين أو أليلات من النيوكليوتيدات.

لبدء القياس الكمي باستخدام تقنية dPCR للرقاقة في الأنبوب ، خذ عينة من الحمض النووي تحتوي على SNVs - الأليل المتحور ، والأليل المقابل من النوع البري. أضف خليطا يحتوي على إنزيم بوليميراز الحمض النووي المقاوم للحرارة ، و dNTPs ، والبادئات.

بعد ذلك ، أضف مجسات قليل النوكليوتيدات الخاصة بالأليل - الموسوة بمراسلين من مضان مختلف الألوان للتمييز بين الأليلات - وجزيء التبريد. قرب المروي من المراسل يمنع تألقه.

قسم المحلول إلى غرف تفاعل رقاقة ميكروفلويدك. تعمل كل غرفة تحتوي على أليل كوعاء تفاعل مستقل.

ضع الأنبوب مع الرقاقة داخل دورة حرارية ، وابدأ التفاعل. عند درجة حرارة عالية ، يتحول الحمض النووي المزدوج الشريطة إلى خيوط مفردة. خفض درجة الحرارة لتلدين البادئات ومجسات قليل النوكليوتيدات إلى مناطقها التكميلية.

عند درجة حرارة التمديد المناسبة ، يمتد بوليميراز الحمض النووي البادئات ويشق المسبار. تتيح المسافة من جهاز التبريد انبعاث التألق للمراسل.

اقرأ إشارات التألق ذات الألوان المختلفة ، وقم بإنشاء مخطط موضع للكشف عن الغرف التي تحتوي على الأليلات.

لتحديد تواتر الأليل الم