موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 7:50 دقيقة • July 8th, 2025
تقنية PCR الرقمية القائمة على الرقاقة بتقسيم تفاعل واحد إلى غرف رقاقة نانوية. يتيح تضخيم التسلسلات المقسمة اكتشاف متغيرات النسخ النادرة - النصوص غير القانونية التي تحدث بتردد منخفض.
للبدء ، خذ عينة تحتوي على (كدنا) لمتغير النسخة النادرة المستهدف والمتغير الشائع. أضف محلولا يحتوي على بوليميراز الحمض النووي المقاوم للحرارة و dNTPs والبادئات.
أضف مجسات قليلة النوكليوتيدات الشائعة والنادرة الخاصة بمتغير النسخ - المصنفة بمراسلين فلوريين وجزيئات تبريدية مختلفة. يمتص المروي مضان المراسل عندما يكون على مقربة.
قم بتحميل الخليط على رقاقة الموائع النانوية. يتم تقسيم المحلول إلى غرف نانوية بحجم موحد. تعمل كل غرفة تحتوي على (كدنا) كوعاء تفاعل مستقل.
ابدأ عملية ركوب الدراجات الحرارية. تفصل درجة حرارة تغيير الطبيعة المرتفعة الحمض النووي المزدوج الشريطة إلى خيوط مفردة. اخفض درجة الحرارة ، مما يسمح للبادئات ومجسات قليل النوكليوتيدات بالتلدين بالمناطق التكميلية على خيوط الحمض النووي المفردة.
قم بزيادة درجة الحرارة للوصول إلى خطوة التمديد ، حيث يمتد بوليميراز الحمض النووي التمهيدي ويشق المسبار. تتيح المسافة من جهاز التبريد انبعاث التألق للمراسل. اقرأ إشارة التألق.
قم بإنشاء مخطط مبعثر يصور الغرف مع هدف النسخ النادر المضخم والغرف الخالية من الهدف. تشير الإشارات الإيجابية للهدف إلى وجود متغير النس
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية