عزل الخلايا الوحيدة عن الدم الكامل عن طريق الانتقاء السلبي المناعي المغناطيسي

لعزل الخلايا الوحيدة ، وهو نوع من خلايا الدم البيضاء ، من الدم الكامل عن طريق الاختيار السلبي المناعي المغناطيسي ، يحصل على دم بشري معالج بمضادات التخثر في أنبوب. أضف محلول كوكتيل الأجسام المضادة الذي يحتوي على الأجسام المضادة التي تمنع مستقبلات Fc ومجمعات الأجسام المضادة رباعية النوعية ثنائية النوع.

يتكون كل مركب من الأجسام المضادة من جسمين مضادين أحادي النسيلة ، مع جسم مضاد واحد خاص بمستضدات سطح الخلية على الخلايا غير وحيدة الخلية ، بما في ذلك خلايا الدم البيضاء والحمراء ، والجسم المضاد الآخر الخاص بالديكستران.

أضف محلول حبة مغناطيسية مطلية بالديكستران. حضن. يرتبط الجسم المضاد الذي يحجب مستقبلات Fc بمستقبلات Fc للخلايا الوحيدة ، مما يمنع الارتباط غير المحدد للأجسام المضادة وحيدة النسيلة.

تتعرف الأجسام المضادة وحيدة النسيلة في مجمعات الأجسام المضادة على مستضدات سطح الخلية المحددة على الخلايا غير الوحيدة الخلية وترتبط بها ، مما يترك الخلايا الوحيدة غير مسماة. ترتبط الخرزات المغناطيسية المطلية بالديكستران بالجسم المضاد المضاد لمجمعات الأجسام المضادة ، مما يربط الخلايا غير أحادية الخلية بالخرز.

ضع الأنبوب في حامل مغناطيسي. تحت تأثير مجال مغناطيسي عالي التدرج ، ترتبط الخلايا المتشابكة بالخرزة المغناطيسية بجدران الأنبوب ، تاركة الخلايا الوحيدة في وسط الأنبوب.

الماصة المحلول المحتوي على الخلايا الأحادية ؛ نقل إلى أنبوب جديد. أضف حبات مغناطيسية ، وربط الخلايا المتبقية غير المرغوب فيها. ضعها تحت تأثير المجال المغناطيسي ، مما يثري مجموعة الخلايا الأحادية.

انقل تعليق الخلية الأحادية إلى أنبوب جديد. الطرد المركزي التعليق. أعد تعليق الخلايا الوحيدة في مخزن مؤقت لمزيد من التحليل.

بعد جمع 40 مل من الدم البشري الكامل الطازج في أربعة أنابيب مفرغة EDTA سعة 10 مليلتر ، استخدم تقنية معقمة لنقل كل الدم إلى أنبوب بروبيلين مخروطي واحد سعة 50 مليلتر في خزانة السلامة الحيوية. باتباع تعليمات الشركة المصنعة من مجموعة عزل الخلايا الأحادية البشرية المختارة ، أضف 2 مل من كوكتيل عزل الخلايا الأحادية من المجموعة إلى أنبوب الدم ، وقم بتدوير الخرزات المغناطيسية من المجموعة لمدة 30 ثانية.

أضف 2 ملم من الخرز إلى الدم ، واستخدم ماصة مصلية سعة 25 مليلتر لخلط الخرز بالدم بعناية. بعد خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة ، قسم الدم بالتساوي بين أربعة أنابيب سعة 50 مليلتر وأضف 30 مل من PBS المعقم المكمل ب 1 مللي مولار EDTA إلى كل أنبوب. امزج مرة أخرى باستخدام ماصة مصلية بلاستيكية سعة 25 مليلتر وضع الأنابيب في حوامل مغناطيسية.

بعد 10 دقائق ، استخدم ماصة لسحب المحتويات من وسط كل أنبوب ، مع الحرص على عدم استنشاق أكثر من 1 مليلتر من خلايا الدم الحمراء ، وتوزيع محتويات الأنبوب في واحد من أربعة أنابيب جديدة سعة 50 ملليلترا. أضف 500 ميكرولتر إضافي من الخرزات المغناطيسية الدوامة إلى كل أنبوب ، واخلط محلول الخلية برفق. ضع الأنابيب مرة أخرى في الحوامل المغناطيسية لمدة خمس دقائق ، قبل نقل المحتويات بعناية من مركز كل أنبوب إلى واحد من أربعة أنابيب جديدة مقاس 50 ملم.

عندما يتم نقل جميع معلقات الخلية ، ضع كل أنبوب جديد سعة 50 مليلتر في حاملات المغناطيس لمدة خمس دقائق قبل نقل محتويات الأنبوب بعناية إلى مجموعة ثالثة من أربعة أنابيب جديدة سعة 50 مل. بعد ذلك ، اجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي ، وأعد تعليق جميع كريات الخلايا الأربعة في ما مجموعه 10 ملليلتر من PBS المعقم للعد.