الثقافة في المختبر وتمايز الخلايا الوحيدة الأولية إلى ضامة

الخلايا الوحيدة هي خلايا مناعية تتمايز إلى ضامة وخلايا شجيرية مقدمة للمستضد للحماية من العدوى.

لزراعة الخلايا الوحيدة والحث على تمايزها في المختبر ، ابدأ بتعليق الخلايا الوحيدة البشرية الأولية في وسط ثقافة مناسب. أضف معلق الخلية في آبار لوحة الاستزراع. احتضان في الظروف الفسيولوجية للسماح للخلايا بالالتصاق.

أضف السيتوكينات المحفزة للتمايز - عامل تحفيز مستعمرة الخلايا الحبيبية والضامة ، أو GM-CSF ، إلى عامل محفز لمستعمرة البلاعم ، أو M-CSF ، إلى آخر. احتضان لمدة مناسبة.

يرتبط GM-CSF بمستقبلاته غير المتجانسة على الخلايا ويحفز تمايز الخلايا الوحيدة. ينتج عن ارتباط GM-CSF تنشيط مسارات الإشارات داخل الخلايا ، مما يؤدي إلى التعبير عن الجينات للتحضير في نمط ظاهري يشبه البلاعم M1.

الخلايا الشبيهة ب M1 - الخلايا المستديرة ذات الحجم السيتوبلازمي الكبير - مؤيدة للالتهابات وتساعد في الدفاع ضد العدوى.

في البئر الآخر ، يرتبط M-CSF بمستقبله المتماثل على الخلايا الوحيدة ويحفز تمايز الخلايا. ينتج عن ارتباط M-CSF تنشيط مسارات الإشارات داخل الخلايا المختلفة عن GM-CSF ، مما يؤدي إلى التعبير عن الجينات للتحضير في نمط ظاهري يشبه البلاعم M2.

الخلايا الشبيهة ب M2 - ذات الشكل الممدود - مضادة للالتهابات وتظهر وظائف إعادة تشكيل الأنسجة وإصلاحها.

خلايا البلاعم المتمايزة جاهزة لمزيد من المقايسات النهائية.

بعد العد ، أعد تعليق الخلايا الوحيدة المعزولة عند 1 في 10 إلى الخلايا السادسة لكل مليلتر من 37 درجة مئوية وسط RPMI 1640 الخالي من المصل المكمل بالمضادات الحيوية ، ولوحة 1 مليلتر من الخلايا المعلقة في ألواح 35 ملم في خزانة السلامة الحيوية. بعد ذلك ، ضع الألواح في حاضنة زراعة الخلايا لمدة 30 إلى 60 دقيقة للسماح للخلايا بالالتصاق بقيعان الآبار.

لتحضير البلاعم ذات النمط الظاهري الشبيه ب M1 ، أضف 100 ميكرولتر من مصل الأبقار الجنينية الذي يحتوي على 25 نانوغرام لكل مليلتر من GM-CSF إلى كل لوحة. لتحضير البلاعم ذات النمط الظاهري الشبيه ب M2 ، أضف 100 ميكرولتر من أبقار الجنين التي تحتوي على 50 نانوغرام لكل مليلتر من M-CSF إلى كل لوحة.