عزل البلاعم عن عقدة الجذر الظهري للفأر باستخدام التفكك الميكانيكي

العقدة الجذرية الظهرية ، أو DRG ، هي مجموعة من أجسام الخلايا العصبية على طول الحبل الشوكي التي تحمل المعلومات الحسية من الجهاز العصبي المحيطي إلى الجهاز العصبي المركزي. تسبب إصابة الأعصاب الطرفية تراكم البلاعم في DRG وتطور آلام الأعصاب.

لعزل البلاعم القابلة للحياة باستخدام طريقة خالية من الإنزيم ، خذ أنسجة DRG للفأر التي تم تشريحها حديثا في الخالط المملوء بمحلول بارد مثلج للحد من الإجهاد الخلوي. باستخدام مدقة ، قم بتجانس الأنسجة ميكانيكيا لتحرير الخلايا.

قم بالتصفية من خلال مصفاة الخلايا لإزالة كتل الخلايا والحصول على تعليق أحادي الخلية في التدفق. يحتوي تجانس الأنسجة على خلايا عصبية وخلايا غير عصبية ، والتي تشمل الضامة والمايلين العائم الحر - الغمد العازل للخلايا العصبية.

أضف المتجانس المصفى إلى أنبوب يحتوي على وسط تدرج الكثافة وجهاز طرد مركزي. تحت قوة الطرد المركزي ، تستقر الخلايا القابلة للحياة ذات الكثافة العالية للطفو في قاع الأنبوب لتشكيل حبيبات ، بينما يظل المايلين معلقا. تخلص من المادة الطافية.

أعد تعليق الخلايا في مخزن مؤقت يحتوي على أجسام مضادة مترافقة بالفلوروفور ضد مستقبلات سطح الخلية الخاصة بالبلاعم. احتضان للمدة المطلوبة. يرتبط الجسم المضاد بمستقبله على خلايا البلاعم ، وبالتالي يقوم بتسمية سطح الخلية بالفلورسنت. يغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.

تحليل الخلايا ب