عزل خلايا الدم المحيطية أحادية النواة عن المعاطف الروائية البشرية

تتكون خلايا الدم المحيطية أحادية النواة ، PBMCs ، من مجموعة غير متجانسة من الخلايا المناعية المتخصصة ، بما في ذلك الخلايا الليمفاوية والخلايا الوحيدة والخلايا المتغصنة.

لعزل PBMCs ، ابدأ بأنبوب يحتوي على دم معطف بشري مصقول تم الحصول عليه حديثا. يحتوي دم المعطف البرتقالي على PBMCs ، جنبا إلى جنب مع الخلايا المحببة ذات النوى متعددة الفصوص ، وكريات الدم الحمراء ، والصفائح الدموية المعلقة في البلازما.

قم بتراكب تعليق الطبقة المصفرية بعناية على حجم متساو من وسط تدرج الكثافة بكثافة محددة مطلوبة مثالية لفصل PBMC.

أثناء الطرد المركزي ، تنفصل أنواع الخلايا المختلفة إلى طبقات مميزة ، بناء على كثافة الخلايا بالنسبة إلى وسط التدرج. بالإضافة إلى ذلك ، فإن السكريات الموجودة في وسط تدرج الكثافة تعزز تراكم كريات الدم الحمراء وترسبها.

ترسل كريات الدم الحمراء والخلايا الحبيبية ذات الكثافة الأعلى إلى قاع الأنبوب ، بينما تشكل البلازما ، ذات الكثافة الأقل ، الطبقة العليا. تشكل PBMCs ، التي لها كثافة أقل من وسط تدرج الكثافة ، طبقة بيضاء غائمة عند السطح البيني الوسيط لتدرج كثافة البلازما.

قم بإزالة طبقة البلازما العلوية. اجمع بعناية الطبقة العكرة التي تحتوي على PBMCs وانقلها إلى أنبوب جديد بوسط خال من المصل. جهاز طرد مركزي لحبيبات PBMCs. تخلص من المادة الطافية التي تحتوي على الصفائح الدموية ووسط التدرج ا