توليد الخلايا المتغصنة غير الناضجة والناضجة والتحمل من الخلايا الوحيدة

لاستنباط استجابة مناعية ، تقدم الخلايا المتغصنة ، DCs ، مستضد معروض مع معقد التوافق النسيجي الكبير من الفئة الثانية والجزيئات المحفزة المشتركة CD80 و CD86. بناء على خصائص الاستجابة المناعية ، يتم تقسيمها إلى DCs غير ناضجة وناضجة ومتحملة.

لتوليد مجموعات فرعية مختلفة من الخلايا المتغصنة في المختبر ، ابدأ بصفيحة متعددة الآبار تحتوي على خلايا وحيدة بشرية - خلايا سلائف مناعية في وسط كامل يحتوي على عوامل النمو والسيتوكين IL-4 - جزيء إشارة.

احتضان الخلايا لفترة طويلة. تحفز عوامل النمو و IL-4 تكاثر الخلايا الوحيدة وتمايزها إلى بلدان غير ناضجة.

تمتلك DCs غير الناضجة مستقبلات التعرف على الأنماط ، PRRs ، وتعبر عن جزيئات منخفضة من معقد التوافق النسيجي الكبير من الفئة الثانية والتحفيز المشترك ، مما يظهر قدرة متناقصة على استنباط استجابة مناعية.

عالج بئر واحد يحتوي على DCs غير ناضجة بعوامل معدلة للمناعة - فيتامين D3 والجلوكوكورتيكويدات. تعمل هذه العوامل المعدلة للمناعة على تقليل تنظيم تعبير معقد التوافق النسيجي الكبير من الفئة الثانية والجزيئات التحفيزية المشتركة. يؤدي هذا إلى التمايز إلى خلايا تتحمل المنشأ - خلايا منظمة مناعية تمنع الاستجابات المناعية المبالغ فيها أو غير المرغوب فيها.

عالج بئر آخر يحتوي على DCs غير الناضجة بعديد السكاريد الدهني، LPS — مستضد. يتفاعل LPS مع مستقبلات الخلايا الشبيهة بالحصيلة 4 - PRR ، ويبدأ سلسلة إشارات ، ويميزها إلى خلايا ناضجة. تعبر هذه الخلايا عن ارتفاع معقد التوافق النسيجي الكبير من الفئة الثانية ، والجزيئات التحفيزية المشتركة ، و PRRs - فعالة في معالجة المستضد وعرضه.

راقب الآبار المعالجة تفاضليا للحصول على خصائص مورفولوجية مميزة تمثل الأنواع الفرعية للخلايا المتغصنة.

قم بزرع أربع مجموعات من الخلايا الوحيدة CD14 + بتركيز 0.3 إلى 0.5 × 10⁶ لكل مليلتر من وسط زراعة الخلايا IL-4 في ألواح من ستة آبار. احتضان الخلايا في حاضنة زراعة الأنسجة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد_{الكربون 2}. في اليوم 4 ، قم بإزالة 850 ميكرولتر من الوسط من المزرعة وأجهزة الطرد المركزي.

شفط المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات في 1 مليلتر من وسط زراعة الخلايا. أضف خليط الخلية مرة أخرى إلى المزرعة. في اليوم 5 ، أضف 1 ميكرولتر من مخزون فيتامين D3 و 1 ميكرولتر من مخزون الديكساميثازون لكل مليلتر من متوسط إلى مجموعتين لتوليد moDCs ذات التحمل

في اليوم 6 ، أضف 200 نانوجرام لكل مليلتر من GM-CSF و 200 نانوجرام لكل مليلتر من IL-4 إلى جميع المجموعات. أضف 1 ميكروغرام لكل مليلتر من LPS إلى إحدى المجموعات المعالجة ب GM-CSF و IL-4 فقط لتوليد moDCs ناضجة.

أضف 1 ميكروغرام لكل مليلتر من LPS إلى مجموعة واحدة من أوضاع التحمل moDCs لتوليد موتيكاسل LPS-tolerogenic أخيرا ، في اليوم 7 ، قم بحصاد أنواع مختلفة من moDCs عن طريق شطف طبق الاستزراع باستخدام PBS-EDTA.