عزل واستزراع الخلايا اللحمية لنخاع العظام من الساق الفأر

توجد الخلايا اللحمية لنخاع العظم ، BMSCs - أسلاف سلالات الأنسجة الهيكلية - داخل تجويف نخاع العظم جنبا إلى جنب مع مجموعة خلايا غير متجانسة بما في ذلك الخلايا الجذعية المكونة للدم ، و HSCs ، وخلايا الدم المتمايزة.

لعزل BMSCs ، ابدأ بقصبة الساق الفأرية التي تم حصادها حديثا. قطع الأطراف القريبة والبعيدة من العظم لفضح تجويف نخاع العظم. ضع العظم المقطوع في أنبوب ميكرو فوج مكيف يحتوي على وسط.

جهاز طرد مركزي بسرعة عالية لطرد نخاع العظم من العظم وتشكيل حبيبات نخاع العظم في قاع الأنبوب. قم بإزالة العظم من الأنبوب. باستخدام إبرة متصلة بحقنة ، قم بتقطيع نخاع العظم لكسر الكتل.

أضف وسيطا إلى التعليق. قم بالتصفية من خلال مصفاة خلوية بحجم شبكي مناسب لإزالة شظايا العظام. ضع المرشح المحتوي على خلايا نخاع العظم في صفيحة ثقافة بلاستيكية.

أثناء الحضانة للمدة المناسبة ، تلتصق BMSCs بالجزء السفلي من لوحة الثقافة البلاستيكية وتتكاثر ، بينما تظل الخلايا غير الملتصقة ، بما في ذلك الخلايا العليا ، معلقة.

تخلص من الوسط الذي يحتوي على الخلايا غير الملتصقة. استخدم التربسين لفصل BMSCs عن اللوحة. أضف وسيطا يحتوي على مصل لتعطيل التربسين. جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية.

أعد تعليق BMSCs في وسط جديد وبذر الخلايا في صفيحة ثقافة. احتضان ، مما يسمح ل BMSCs بالالتصاق باللوحة وتشكيل طبقة أحادية.

عندما يتم جم