JoVE Encyclopedia of Experiments
علم المناعة
0 مشاهدات • 3:03 د • July 8th, 2025
الشحمية ، أو الخلايا المخزنة للدهون ، هي الخلايا السائدة في الأنسجة الدهنية - التي تفرز الأديبوكينات - جزيئات الإشارات المناعية التي تنظم الاستجابة المناعية.
لتوليد الخلايا الشحمية في المختبر ، ابدأ بصيحة متعددة الآبار تحتوي على مزرعة ملتصقة للخلايا اللحمية لنخاع عظم الفأر ، BMSCs ، - خلايا متعددة القدرات غير المتمايزة.
عالج الخلايا بوسط تحريض للخلايا الشحمية يحتوي على مثبطات إنزيم الفوسفوديستراز وديكساميثازون - وهو جلوكوكورتيكويد اصطناعي - لتحفيز تمايز الخلايا.
تدخل المثبطات إلى الخلايا وتعطيل فوسفوديستراز النيوكليوتيدات الدورية ، وهي إنزيمات ضرورية لتحطيم الأدينوزين أحادي الفوسفات الدوري ، أو cAMP. يؤدي هذا التثبيط إلى زيادة مستويات المخيم داخل الخلايا ، وهو أمر بالغ الأهمية لتمايز الخلايا.
يرتبط ديكساميثازون بالمستقبلات داخل الخلايا في BMSCs ويدخل النواة لتنشيط الجينات المشاركة في تخليق الدهون وتراكمها. يؤدي هذا إلى تمايز BMSCs إلى خلايا شحمية - الخلايا السلائف للخلايا الشحمية الناضجة.
استبدل الوسط المستهلك بوسط حثي جديد للحفاظ على الخلايا الشحمية. بعد فترة محددة ، عالج الخلايا بوسط قاعدة الخلايا الشحمية الذي يحتوي على نسبة عالية من الجلوكوز والأنسولين.
يرتبط الأنسولين بمستقبلاته الخاصة بسطح الخلية وينشط نقل ناقلات الجلوكوز على سطح الخلية ، مما يسهل امتصاص الجلوكوز في الخلايا الشحمية. تستخدم الخلايا الجلوكوز الزائد لتصنيع قطرات الدهون ، مما يؤدي إلى تكوين الدهون - عملية تراكم الدهون - مما يعزز التمايز إلى خلايا شحمية ناضجة.
عالج الخلايا بصبغة ملطخة للدهون وراقبها تحت المجهر الضوئي. تظهر الخلايا الشحمية الناضجة كخلايا مستديرة مع قطرات دهنية حمراء متعددة.
للحث على تمايز الخلايا الشحمية للخلايا الجذعية لنخاع العظام ، استبدل وسط زراعة الخلايا لزراعة خلايا نخاع العظم المتقاربة بوسط تحريض الخلايا الشحمية. بعد يومين من الاستزراع ، استبدل المادة الطافية بوسط تحريض الخلايا الشحمية الطازجة ، وقم بالتبديل إلى الوسط القائم على الخلايا الشحمية في اليوم 4. في اليوم 7 ، تأكد من أن الخلايا لديها قطرات دهنية متراكمة وأن عرض النمط الظاهري مشابه للخلايا الشحمية الناضجة.