عزل الكريات البيض الكبدية الهامشية من كبد الفأر

تم العثور على الكريات البيض الهامشية الكبدية ، MH ، الكريات البيض ، ملتصقة بجدران الأوعية الدموية الكبدية المتخصصة أو الجيوب الأنفية ، والتي تصطف عليها الخلايا البطانية. يتم تجنيد كريات الدم البيضاء MH في الأنسجة المحيطة استجابة للالتهاب.

لحصاد كريات البيض MH ، ابدأ بفأر قتل رحيم في وضع ضعيف. شق تجاويف الصفاق والصدر ، وتعريض الكبد والمركب القلبي الرئوي.

قم بإزاحة الأمعاء لكشف الوريد البابي الذي ينقل الدم من الطحال والجهاز الهضمي والأعضاء المرتبطة به إلى الكبد. أدخل إبرة متصلة بمضخة تمعجية في الوريد البابي.

قم بتشريح الوريد الأجوف السفلي — وهو وعاء دموي رئيسي يحمل الدم غير المؤكسج من الكبد إلى القلب — لتجميع الترويد أثناء التروية.

تقويم الكبد من خلال الوريد البابي مع مخزن مؤقت يحتوي على مضاد للتخثر بمعدل تدفق منخفض لفترة قصيرة. تساعد هذه الخطوة على إزالة الدم بالخلايا غير الملتصقة من الأوعية الدموية للكبد من خلال تدفق الوريد الأجوف السفلي. تخلص من هذا الريشات الملوثة بالدم.

الآن ، قم بإجراء معدل تدفق أعلى. يؤدي التروية القسرية عند زيادة معدلات التدفق والقص إلى تعطيل الالتصاق بين كريات الدم البيضاء MH والبطانة الداخلية للأوعية الدموية ، وبالتالي فصل كريات البيض MH عن الجدار الجيبي.

اجمع ونقل البرفوز الذي يحتوي على كريات الدم البيضاء MH وخلايا الدم الأخرى إلى أنبوب جديد. الطرد المركزي. أعد تعليق الحبيبات التي تحتوي على كريات الدم البيضاء MH لمزيد من التحليل النهائي.

لجمع كريات البيض الكبدية الهامش للفأر ، فور توقف التنفس ، استخدم مقصا معقما وملقطا لأنسجة الأسنان لعمل شق في البطن في خط الوسط حتى عملية الخنجري. بعد ذلك ، استخدم الملقط لرفع القص وقطع الحجاب الحاجز والقفص الصدري بعناية على كلا الجانبين.

قم بتثبيت تمرق على القص وقم بطي القفص الصدري بشكل منحرف لفضح المركب القلبي الرئوي. حرك الأمعاء خارج تجويف البطن إلى يسار ، مع تعريض الوريد البابي. بعد ذلك ، قم بتوصيل إبرة قياس 30 بمضخة تمعجية ، وأدخلها في الوريد البابي ، المنقاري إلى الوريد الطحالي.

قطع الوريد الأجوف السفلي فوق الحجاب الحاجز للسماح بتصريف وجمع الريشة من تجويف الصدر. بعد ذلك ، قم بتشغيل المضخة التمعجية بسرعة حوالي 3 ملليلتر في الدقيقة ، واجمع المليلتر الأول من الريشات الملوثة بالدم من حوض تجويف الصدر. عندما يتم جمع 3 ملليلتر ، قم بإيقاف تشغيل المضخة.

بعد ذلك ، بعد إدخال إبرة فراشة عيار 21 متصلة بحقنة سعة 10 مليلتر ، أعد بدء التروية بسرعة تصل إلى 4 ملليلتر في الدقيقة حتى يتم جمع 10 ملليلتر من الريشات من تجويف الصدر. عندما يتحول لون الكبد إلى اللون البني الفاتح ، قم بإنهاء التروية. بعد ذلك ، انقل الريشات إلى أنبوب سعة 15 مل. الطرد المركزي ، وبعد ذلك ، استنشق المادة الطافية.