توسيع الخلايا القاتلة الطبيعية من خلايا الدم المحيطية أحادية النواة خارج الجسم الحي

الخلايا القاتلة الطبيعية ، NK ، هي خلايا ليمفاوية حبيبية كبيرة تقضي على الأورام والالتهابات الميكروبية.

لتوسيع الخلايا القاتلة الطبيعية خارج الجسم الحي ، خذ تعليقا لخلايا الدم المحيطية أحادية النواة ، PBMCs ، التي تحتوي على مجموعة غير متجانسة من الخلايا الليمفاوية ، بما في ذلك الخلايا القاتلة الطبيعية. أضف الخلايا المغذية المشععة - الخلايا الأرومية الليمفاوية غير المتكاثرة - التي تعبر عن إنترلوكين 21 ، mIL-21 المرتبط بالغشاء ، المطلوب لتنشيط الخلايا القاتلة الطبيعية وتوسيعها.

أضف الزراعة المشتركة في ثقافة متخصصة بئر مع غشاء منفذ للغاز في الأسفل ، مما يسمح بتبادل الغازات. تستقر الخلايا وتتكاثر لفترة طويلة دون الحاجة إلى المرور.

أضف إنترلوكين 2 وIL-2 وإنترلوكين 15 وIL-15 — السيتوكينات لتكاثر الخلايا القاتلة الطبيعية. احتضان لفترة كافية في الظروف الفسيولوجية.

يرتبط mIL-21 على الخلايا المغذية بمستقبل غير متجانس محدد على الخلايا القاتلة الطبيعية. IL-15 الخارجية و IL-2 ربط مستقبلات كل منهما. يؤدي الارتباط إلى مسارات إشارات مختلفة في اتجاه مجرى النهر - تنشيط التعبير الجيني - مما يحد من الشيخوخة الخلوية ويؤدي إلى تكاثر الخلايا القاتلة الطبيعية لفترات طويلة.

باستخدام قياس التدفق الخلوي ، قم بتقييم توسع الخلايا القاتلة الطبيعية على فترات زمنية منتظمة.

ارسم البيانات المسجلة لتحليل معدل تمدد الخلايا ونقاوتها - النمو الانتقائي لنوع الخلية القاتلة الطبيعية المستهدفة. يشير التوسع المتعدد خلال فترة الحضانة إلى انتشار مستدام مع الحفاظ على نقاء عال.

اغسل خلايا الدم المحيطية أحادية النواة ، أو PBMCs ، و 100 خلية 221-mIL-21 مشعة بجاما بشكل منفصل عن طريق الطرد المركزي عند 400 جم لمدة 5 دقائق باستخدام 10 ملليلتر من وسائط R-10.

بعد الطرد المركزي ، احفظ 1 × 10⁶ PBMCs لقياس التدفق الخلوي ، واخلط 5 × 10⁶ PBMCs مع 10 × 10⁶ 100 خلية 221-mIL-21 مشعة بجاما في صفيحة خاصة مكونة من 6 آبار. أضف 30 مل من وسائط R-10 المكملة بالإنترلوكين -2 البشري والإنترلوكين البشري -15 إلى نفس الصفيحة المكونة من 6 آبار ، واحتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون مع استبدال الوسائط كل ثلاثة إلى أربعة أيام.

أثناء الحضانة ، قم بتسجيل إجمالي عدد الخلايا القاتلة الطبيعية للدم المحيطي أو PBNK ، وقابليتها للحياة ، وقم بإجراء قياس التدفق الخلوي كل ثلاثة إلى أربعة أيام لحساب معدل تمدد الخلايا القاتلة الطبيعية.