تكوين المشبك المناعي بين الخلايا التائية المساعدة والخلايا العارضة للمستضد

تتواصل الخلايا المناعية مع بعضها البعض من خلال تفاعل مستقبلات متعددة ، وتشكل مقاطعة متخصصة - مشبك مناعي. يعمل هذا المشبك كموقع لتبادل جزيئات الإشارات الضرورية للاستجابة المناعية.

لدراسة تكوين المشبك المناعي في المختبر ، ابدأ بشريحة ميكروويل مطلية بمصفوفة الطابق السفلي تحتوي على ثقافة ملتصقة للخلايا العارضة للمستضد البشري المنشط ، APCs.

تقدم APCs المنشطة مستضدات مرتبطة بمركب التوافق النسيجي الرئيسي أو جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير على سطحها ، وهو أمر ضروري لتنشيط الخلايا التائية. يتم تمييز هذه الخلايا بصبغة فلورية زرقاء لسهولة التعرف عليها.

عالج الآبار بالخلايا الليمفاوية التائية المساعدة البشرية المؤتلفة. تعبر هذه الخلايا الليمفاوية التائية المساعدة عن بروتينات الغشاء ذات العلامات بالبروتين الفلوري الأخضر — CD63 الموجود في الحويصلات الإفرازية. هذا يتيح تتبع الحويصلات الإفرازية.

تتفاعل مستقبلات الخلايا التائية للخلايا الليمفاوية مع مجمعات مستضد معقد التوافق النسيجي الكبير على APCs ، مما يجعل الخلايا الليمفاوية التائية المساعدة بالقرب من الخلايا العارضة للمستضد ، مما يؤدي إلى الاقتران.

عند الاقتران ، تتفاعل جزيئات الإشارات التحفيزية المشتركة على APCs مع مستقبلات الخلايا الليمفاوية - وتشكل مجموعة حول موقع الاقتران ، مما يؤدي إلى إنشاء مشبك مناعي.

يؤدي

تكوين المشبك إلى إعادة تنظيم الهيكل الخلوي للخلايا الليمفاوية ، بما في ذلك إعادة وضع عناصر الهيكل الخلوي - خيوط الأكتين والأنابيب الدقيقة. تسهل إعادة التنظيم هذه حركة الحويصلات نحو المشبك بالقرب من APCs.

راقب الخلايا تحت المجهر الفلوري. سجل حركة الحويصلات الخضراء داخل الخلية التائية المساعدة نحو APCs الزرقاء ، مما يؤكد تكوين المشبك المناعي.

استرجع شرائح الغرفة التي تحتوي على متتبع الخلية المسمى باللون الأزرق المكورات العنقودية السموم المعوية E-pulsed خلايا راجي الملتصقة من الحاضنة. قم بشفط وسط الثقافة بعناية من كل بئر ، واحدا تلو الآخر ، مع وضع ماصة في زاوية من البئر.

استبدل الوسط على الفور ب 200 ميكرولتر من خلايا Jurkat المعلقة في وسط زراعة الخلايا. إذا تم إجراء الفاصل الزمني ، فانتقل بسرعة إلى المجهر.

حدد موقع شريحة الغرفة في حاضنة مرحلة المجهر وحدد بعض الحقول المناسبة.

تحضير المجهر في غرفة الحضانة قبل التصوير. بعد إضافة خلايا جوركات إلى كل بئر تحتوي على خلايا راجي ، حدد موقع شريحة غرفة الميكروويل بسرعة على حاضنة مرحلة المجهر المسخن مسبقا ، وحدد بعض مواضع XY.

إذا تم التخطيط لتجربة نقطة النهاية فقط ، فقم باحتضان شريحة الغرفة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 1 إلى ساعتين. بعد فترة الثقافة ، تحقق من تكوين المترافق ثم قم بإصلاح المترافقات ، كما هو موضح في بروتوكول النص.