موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:25 دقيقة • July 8th, 2025
تحتوي الأنابيب المنوية في الخصيتين على خلايا سيرتولي التي تغذي الخلايا الجرثومية. ترتبط خلايا سيرتولي عبر تقاطعات ضيقة وترتبط بقوة بمصفوفة القاعدة الغنية بحمض الهيالورونيك. ينظم هذا الترتيب لخلايا سيرتولي دخول الخلايا المناعية إلى النبيبات ويحمي الخلايا الجرثومية النامية من التدهور.
لعزل خلايا سيرتولي ، ابدأ بأنبوب يحتوي على أنابيب منوية مهضومة جزئيا مشتقة من خصيتين الفئران. تفتقر هذه الأنابيب إلى الخلايا المحيطة بالأنبوب، وهي خلايا العضلات الملساء المحيطة بالأنابيب المنوية.
عالج الأنابيب بكوكتيل إنزيمي يحتوي على الهيالورونيداز — الضروري للتحلل المائي لحمض الهيالورونيك — والحمض النووي.
تدخل الهيالورونيداز إلى الأنابيب وتشقق حمض الهيالورونيك - عديد السكاريد القاعدي - مما يؤدي إلى انفصال خلايا سيرتولي عن المصفوفة السفلية وإطلاق الخلايا الجرثومية في المحلول. يهضم DNase أي ملوثات للحمض النووي من المحلول ، مما يمنع تراكم الخلايا.
اغسل الأنابيب المهضومة إنزيميا بمحلول عازل ، وإزالة الإنزيمات المتبقية والشظايا الخلوية والخلايا الجرثومية. أعد تعليق الأنابيب المهضومة وقم بتحميل التعليق في مجموعة حقنة إبرة.
مرر المحلول بشكل متكرر لإنشاء قص هيدروديناميكي وتعطيل الوصلات الضيقة لخلايا سيرتولي ، وإطلاقها كخلايا مفردة جنبا إلى جنب مع الخلايا الجرثومية المتبقية.
قم بتصفية تعليق الخلية وإزالة الحطا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية