عزل شبكة الخلايا المناعية اللثوية عن كتل أسنان الفئران

تحيط اللثة ، أو أنسجة اللثة ، بجزء عنق الرحم من الأسنان وعظم الفك.

يتكون نسيج اللثة من طبقة ظهارة ، مفصولة عن النسيج الضام الأساسي بواسطة غشاء أساسي غني بالكولاجين الرابع. يحتوي النسيج الضام اللثوي على شبكة خلايا مناعية ، بما في ذلك الخلايا الليمفاوية والخلايا البدينة والعدلات التي تحمي اللثة من العدوى.

لعزل شبكة الخلايا المناعية اللثوية ، خذ كتل أسنان الفئران التي تحتوي على أنسجة اللثة متصلة بإحكام. عالج الكتل بكوكتيل إنزيمي - يحتوي على الكولاجيناز من النوع الرابع و DNases.

تدخل الكولاجيناز إلى الأنسجة ، وتحلل الكولاجين الرابع ، وتعطل الغشاء القاعدي وظهارة اللثة ، مما يتسبب في ارتخاء اللثة من الأسنان. وفي الوقت نفسه ، تعمل DNases على تحلل ملوثات الحمض النووي. أضف عامل مخلب إلى الأنبوب. لإزالة الكاتيونات ثنائية التكافؤ ومنع تراكم الخلايا.

انقل كتل الأسنان المهضومة إلى طبق بتري يحتوي على وسط DNase. استخرج أنسجة اللثة من كتل الأسنان ، وانقلها إلى مصفاة الخلايا.

باستخدام المكبس ، اهرسي الأنسجة. يؤدي هذا التفكك الميكانيكي إلى تعطيل الطبقة الضامة اللثوية ، وإطلاق الخلايا المناعية من الأنسجة. اغسل المصفاة بالوسائط واجمع الخلايا المنبعثة في المرشح.

الطرد المركزي للمرشح ، وتكوير الخلايا ، والتخلص من المادة الطافية التي تحتوي على الإنزيمات المتبقية والحطام. أعد تعليق مجموعة الخلايا التي تحم