توصيف مصائد البلاعم خارج الخلية في عينات أنسجة رئة الفئران

مصائد البلاعم خارج الخلية ، METs ، هي هياكل شبيهة بالويب تطلقها البلاعم لاحتجاز مسببات الأمراض والقضاء عليها.

تتكون METs من ألياف الكروماتين خارج الخلية المرتبطة بمصفوفة البروتيناز المعدني -9 و MMP-9 والهيستون H3 و H3Cit - وهو بروتين هيستون معدل يتم فيه تحويل الأرجينين إلى سيترولين.

لتوصيف METs في أقسام أنسجة رئة الفئران المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين ، أولا ، قم بتجفيف الشرائح. انغمس في الزيلين لإزالة الأقسام من الأقسام. استخدم الإيثانول المائي لإعادة ترطيب الأقسام.

قم بتسخين الأقسام لكسر الروابط المتشابكة للبروتين المستحث بالفورمالين ، مما يعرض المستضدات المستهدفة لارتباط الأجسام المضادة اللاحقة.

أضف محلولا يحتوي على البروتين لمنع مواقع الارتباط غير المحددة. احتضن بمزيج من الأجسام المضادة الأولية المضادة ل MMP-9 ومضادة ل H3Cit ومضادة ل F4 / 80.

يرتبط الجسم المضاد المضاد F4 / 80 بسطح خلية البلاعم البروتين السكري F4 / 80. ترتبط الأجسام المضادة ل MMP-9 والمضادة ل H3Cit ب MMP-9 و H3Cit في METs على التوالي. أضف أجساما مضادة ثانوية مختلفة مترافقة بالفلوروفور ترتبط بالأجسام المضادة الأولية الخاصة بها المرتبطة بأهدافها.

قم بتركيب الأقسام بوسيط تركيب يحتوي على DAPI. يلطخ DAPI ألياف الكروماتين الخاصة ب MET. باستخدام مجهر متحد البؤر ، قم بتصوير الأقسام لتصور تألق علامات MET.

تتمي