JoVE Encyclopedia of Experiments
علم المناعة
0 مشاهدات • 3:51 د • July 8th, 2025
العدلات - الخلايا المناعية ذات النوى متعددة الفصوص ، تنظم مناعة القصبة الهوائية عن طريق ابتلاع مسببات الأمراض الغازية.
لفصل العدلات عن إفراز القصبة الهوائية ، ابدأ بقناة ميكروفلويدية حلزونية.
تنشأ القناة الحلزونية من المدخل المركزي ، وتمتد تدريجيا وتتشعب إلى منافذ الجدار الداخلي والخارجي. تتميز قناة التشعب بسماكات متفاوتة ، مما يضمن فصلا فعالا. تشبه كل قناة منحنية شبه منحرف ، حيث يكون ارتفاع الجدار الخارجي أكبر من ارتفاع الجدار الداخلي ، مما يولد نمط تدفق متغير.
املأ المدخل بإفراز القصبة الهوائية البشرية المخفف مسبقا والذي يتكون من مجاميع الميوسين والعدلات وكريات الدم الحمراء - كملوثات عرضية. قم بتدفق العينة بمعدل تدفق محدد عبر القناة الدقيقة الحلزونية مما يؤدي إلى تشتت الخلايا والركام.
عندما تنتقل الخلايا عبر القناة شبه المنحرفة ، فإنها تواجه قوى سحب دين ورفع بالقصور الذاتي. يخلق التفاعل بين هاتين القوتين توازنا ، ويفصل الخلايا حسب أحجامها. نتيجة لذلك ، تتراكم العدلات الأكبر حجما بالقرب من الجدار الداخلي للقناة ، بينما تظل كريات الدم الحمراء ومجاميع الميوسين بالقرب من الجدار الخارجي للقناة.
أخيرا ، تتحرك العدلات عبر القناة الأوسع ويتم جمعها في مخرج الجدار الداخلي.
في المقابل ، تجمع القناة الضيقة كريات الدم الحمراء ومجاميع الميوسين في مخرج الجدار الخارجي ، مما يضمن فصل العدلات بكفاءة.
استخدم حقنة سعة 10 ملليلتر لجمع 1 ملليلتر من عينات إفراز مجرى الهواء في 9 ملليلتر من محلول ملحي مخزن بالفوسفات. ثم ، بمساعدة ماصة حادة ، قم بتجانس عينة المخاط. بعد ذلك ، استخدم مصفاة خلايا نايلون 40 ميكرومتر لتصفية المخفف ، وإزالة قطع كبيرة من الأنسجة أو جلطات الدم. بعد اكتمال التصفية ، ضع العينة على الجليد.
بعد ذلك ، أضف 50 مل من المحلول الملحي المخزن بالفوسفات إلى مخفف العينة سعة 0.5 ملليلتر لتحقيق تركيز نهائي يبلغ 1,000 مرة من العينة المخففة. استخدم دليل السوائل لتجميع شريحة PDMS من أجل تطبيق تدفق موحد على كل قناة من القنوات الدقيقة الحلزونية الأربعة. بعد ذلك ، استخدم موصل لور ذكر بقطر 1/16 بوصة للاتصال بالمدخل ومخرج الجدار الداخلي ومنافذ مخرج الجدار الخارجي لدليل السوائل.
ثم قم بتوصيل أنبوب سيليكون بتعليق العينة. بعد ذلك ، قم بتوصيل المضخة التمعجية بأنبوب المدخل. ضع أنبوب مخرج الجدار الخارجي في خزان النفايات. ثم ضع نهاية أنبوب المدخل وأنبوب مخرج الجدار الداخلي في خزان العينة.
بعد وضع الأنبوب ، اترك أنبوبا سعة 50 مليلتر مملوءا ب 5 ملليلتر من المحلول الملحي المتعاقد مع الفوسفات بدون الكالسيوم والمغنيسيوم في خزان العينة. بعد ذلك ، من أجل تجهيز الجهاز ، ابدأ في الضخ بمعدل تدفق يبلغ حوالي 1 مليلتر في الدقيقة.
بعد وضع العينة في خزان العينة ، قم بتشغيل المضخة التمعجية واضبط معدل التدفق على 4 ملليلتر في الدقيقة. بعد أن يصل حجم العينة إلى الحجم المطلوب من حوالي 1 إلى 2 ملليلتر ، أوقف العملية وافصل الأنبوب.