JoVE Encyclopedia of Experiments
علم المناعة
0 مشاهدات • 3:28 د • July 8th, 2025
لتسمية الفئران T المساعدة ، الخلايا الليمفاوية Th التي تحمل مستقبلات الخلايا التائية ، TCR ، الخاصة بببتيد أولبومين الدجاج ، تأخذ أنبوبا يحتوي على أجسام مضادة وحيدة النسيلة ذات علامات إشعاعية ، mAbs ، مع النشاط الإشعاعي المطلوب.
يتكون mAb من mAb الفئران الخاص ب TCR معبرا عنه على غشاء الخلايا الليمفاوية Th الفئران. يجمع المخلب بين mAb ونظير النحاس الباعث للبوزيترون ، مما يشكل مركبا مستقرا.
تمييع mAbs الملصقة بالمحلول الملحي. بعد ذلك ، أضف mAbs المخففة ذات العلامات الإشعاعية إلى صفيحة متعددة الآبار تحتوي على تعليق الخلايا الليمفاوية Th. احتضان لفترة وجيزة.
داخل المزرعة ، ترتبط mAbs ذات العلامات الإشعاعية ب TCRs على أغشية الخلايا الليمفاوية Th. بعد الحضانة ، انقل تعليق الخلية إلى أنبوب جديد.
الطرد المركزي. تخلص من المادة الطافية التي تحتوي على أجسام مضادة غير مرتبطة بعلامات مشعة. أعد تعليق الخلايا الليمفاوية Th في وسط وانقلها إلى صفيحة متعددة الآبار. احتضان لفترة طويلة.
يتسبب ارتباط mAb-TCR المسمى بالإشعاع في تجنيد بروتين المحول في الجانب السيتوبلازمي من غشاء البلازما ، والذي ترتبط به كلاثرين ثلاثي الهيكلات وتشكل حفرة مغلفة بالكلاثرين.
تساعد البروتينات الملحقة على اقتلاع الحويصلة من غشاء البلازما ، مما يسهل استيعاب مركب mAb-TCR المسمى بالإشعاع في السيتوبلازم. في النهاية ، يتم إعادة التعبير عن TCRs على أغشية الخلايا الليمفاوية Th.
الخلايا الليمفاوية Th ذات العلامات الإشعاعية جاهزة لمزيد من التجارب.
بالنسبة لوضع العلامات الإشعاعية لخلايا TH1 الخاصة ببويض الدجاج ، استخدم أولا معايرة الجرعة لسحب 37 ميغا بيكريل من الجسم المضاد المشع الخاص بالخلايا التائية ذات الأهمية ، في حقنة بدون حجم ميت.
بعد ذلك ، قم بتوزيع الجسم المضاد في كوب تفاعل ، وقم بقياس وطرح الكمية المتبقية من التفاعل في المحقنة من الكمية التي تم سحبها. ثم أضف ملليلترا واحدا من المحلول الملحي إلى الكوب لتوليد محلول 37 ميغا بيكريل لكل ملليلتر.
بعد ذلك ، أضف مرتين في 10 إلى خلايا OVA-TH1 السادسة في 0.5 مل من الوسط الكامل لكل بئر من صفيحة 48 بئرا ، متبوعة ب 20 ميكرولترا من محلول الأجسام المضادة الملصقة بالإشعاع. بعد 30 دقيقة في حاضنة ثقافة خلايا ثاني أكسيد الكربون الآمنة للإشعاع 37 درجة مئوية و 7.5٪ ، قم بتجميع الخلايا ذات العلامات الإشعاعية في أنبوب مخروطي سعة 50 مليلتر لغسلتين في 10 ملليلتر من 37 درجة مئوية PBS.
تصف هذه المقالة طريقة للوسم الإشعاعي للخلايا اللمفاوية التائية المساعدة الفأرية التي تعبر عن مستقبلات خلايا تائية متخصصة في ببتيد أوفالبومين الدجاج. تتضمن العملية استخدام أجسام مضادة أحادية النسيلة موسومة إشعاعياً لتسهيل عملية إدخال معقد TCR إلى سيتوبلازم الخلايا اللمفاوية.
يتيح الوسم الإشعاعي للخلايا اللمفاوية التائية المساعدة للفئران باستخدام الأجسام المضادة أحادية النسيلة تتبعاً دقيقاً وغير جراحي لانتقال الخلايا المناعية باستخدام تصوير PET/CT. وتدعم هذه القدرة عملية التحقق من الأهداف في المراحل المبكرة وتقليل المخاطر الميكانيكية في اكتشاف الأدوية التي تركز على علم المناعة. كما يعزز هذا النهج الثقة التنبؤية لاستراتيجيات التعديل المناعي ويوجه قرارات المحفظة البحثية في أبحاث الأورام المناعية وأبحاث المناعة الذاتية.
تندمج طريقة الوسم الإشعاعي هذه ضمن التسلسل الممتد من مرحلة الاكتشاف إلى الدراسات قبل السريرية، مما يدعم كلًا من الدراسات الميكانيكية المبكرة وسير عمل التصوير الترجمي.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 29 أغسطس 2026