تقنية في المختبر للتمييز بين الخلايا التائية المساعدة التي تنتج GM-CSF عن الخلايا التائية الساذجة

عامل تحفيز مستعمرة الخلايا الحبيبية والبلاعم ، يتم إفراز GM-CSF بواسطة مساعد T المنتج للمعدلة وراثيا السائل الدماغي النخاعي أو خلايا T_HGM. تظهر هذه الخلايا تعبيرا منخفضا عن السيتوكينات الأخرى الخاصة بالخلايا التائية المساعدة.

لبدء التمايز في المختبر لخلايا_THGM ، خذ معلق الخلايا التائية المساعدة - معزول من طحال الفأر - يحتوي على خلايا ناضجة نشطة بالمستضد وخلايا ساذجة غير متمايزة.

أضف الأجسام المضادة ذات العلامات الفلورية التي تستهدف علامات السطح المميزة للخلايا الساذجة والناضجة. قم بإجراء فرز الخلايا التي يتم تنشيطها بالفلورة لعزل الخلايا التائية الساذجة.

ضع الخلايا في طبقة مغلفة جيدا بالأجسام المضادة التي ترتبط بمركب مستقبلات الخلايا التائية. أضف جسما مضادا يرتبط بالمستقبلات التحفيزية المشتركة. الارتباط التآزري ينشط الخلايا.

أضف إنترلوكين 7 — السيتوكين — مما يؤدي إلى التمايز في خلايا_{TH GM}وإنتاج GM-CSF. أضف أسيتات فوربول ميريستات، PMA — مركب مؤيد للالتهابات، الأيونومايسين — أيونوفور الكالسيوم، ومثبط لنقل البروتين.

يدخل PMA الخلية وينشط بروتين كيناز. ينقل الأيونومايسين المنفذ للغشاء أيونات الكالسيوم داخل الخلية - مما يرفع تركيز الكالسيوم داخل الخلايا.

يبدأ

تنشيط بروتين كيناز وارتفاع مستوى الكالسيوم إشارات تعيد تحفيز خلايا_{TH H}GM - مما يؤدي إلى زيادة إنتاج GM-CSF. يمنع مثبط نقل البروتي