تقنية لزراعة الخلايا العصبية في الحصين الفأر

خذ الحصين جرو الفأر المحصود في منطقة عازلة.

قطع الحصين إلى أجزاء أصغر ونقلها إلى أنبوب مخروطي الشكل.

اغسل الأنسجة بالعازلة. بمجرد أن تستقر الشظايا ، قم بإزالة المخزن المؤقت. الآن ، أضف المخزن المؤقت الطازج والتربسين.

أثناء الحضانة ، يهضم التربسين ، وهو إنزيم محلل للبروتين ، المصفوفة خارج الخلية للأنسجة ، مما يؤدي إلى إرخاء الخلايا العصبية في الحصين.

اغسل الأنسجة المهضومة بمحلول عازل.

بمجرد أن تستقر الشظايا ، قم بإزالة المخزن المؤقت. أضف عازلة جديدة وماصة الأنسجة بشكل متكرر لفصلها ميكانيكيا ، والحصول على تعليق أحادي الخلية.

بمجرد أن يستقر النسيج غير المهضوم ، انقل معلق الخلية إلى أغطية مطلية ب poly-L-lysine مع دعامات الشمع داخل صفيحة مزرعة تحتوي على وسائط.

ترتبط الخلايا بالأسطح المطلية ب poly-L-lysine من خلال التفاعلات الكهروستاتيكية.

الآن ، ضع الغطاء الملتصق بالخلايا العصبية المتجهة لأسفل في طبق يحتوي على الخلايا الدبقية القشرية أو غير العصبية في وسائط خالية من المصل.

في الثقافة ، تمنع دعامات الشمع الاتصال المباشر بين الخلايا العصبية والخلايا الدبقية ، مما يخلق بيئة مكروية حيث تعزز العوامل التي تفرز الخلايا الدبقية بقاء الخلايا العصبية ونضجها.

للبدء ، قم بتشريح ستة إلى ثمانية حصين من الجراء بعد الولادة ، البالغة من العمر يوما واحدا مع HBSS المتوسطة في طبق بتري. يقطع الحصين بمقص الت